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目的:糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)和糖尿病周围神经病变(Diabetic peripheral neuropathy，DPN)都是是糖尿病(diabetesmellitus，DM)最常见且较难治愈的微血管并发症，也是导致终末期肾病和心血管事件的病因之一，更是致残和致死的原因之一。近年来，糖尿病的发病呈逐年增高的趋势，随着病程的增长，其慢性并发症也愈加严重。据统计，病程在10年以上的糖尿病患者中有超过50％的患者会出现糖尿病肾病，有超过30％的患者会出现糖尿病周围神经病变。因此，糖尿病并发症的治疗和预防即显得尤为重要。但是，这些并发症的发病机制复杂，尚未完全阐明。近年来，有研究认为2型糖尿病(T2DM)是一种由糖代谢和脂代谢紊乱引起固有性免疫的长期慢性激活导致的慢性炎症反应，而且在T2DM微血管并发症DN和DPN的研究中也发现，免疫和炎症反应在其进展中发挥了重要作用，如炎症细胞的趋化、细胞因子的种类等均与这些疾病有关。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作为一种前炎症因子已被证明参与DN的发生、发展。另外，单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)也是一种趋化单核细胞和巨噬细胞的重要趋化因子，在肾小球内，它可由TNF-α诱导，从而参与DN炎症反应的全过程。白细胞介素-12(IL-12)是一种多效性的细胞因子，具有增强免疫应答和免疫调节作用。这些炎症因子在不同并发症进展中的作用以及炎症机制中的重要性还不十分清楚。因此，本研究拟选择健康对照者、T2DM患者、DN患者和DPN患者作为研究对象，观察血清中TNF-α蛋白水平变化与单个核细胞TNF-α、MCP-1和IL-12mRNA的表达，分别探讨其与DN和DPN之间发生发展的关系，为临床干预提供更充足的科学依据。
方法:
1、实验对象。
本次试验设定为正常对照组(normal control,NC组)、2型糖尿病组（T2DM组）、糖尿病肾病组（DN组）、糖尿病周围神经病变组（DPN组）和糖尿病肾病合并糖尿病周围神经病变组(DN+DNP组)。正常对照组(NC)为2012年8月-2012年12月到体检中心健康体检者，共16例（男5例，女11例，平均年龄为38.75±8.63岁）。DM组26例（男7例，女19例，平均年龄为52.15±14.16岁）。DN组20例（男14例，女6例，平均年龄为49.05±13.51岁）。DPN组14例（男8例，女6例，平均年龄为51.50±15.19岁）。DN+DNP组20例（男8例，女12例，平均年龄为62.75±10.69岁）。均为2012年8月-2012年12月在邢台市人民医院同期住院患者。T2DM的诊断符合1999年世界卫生组织(WHO)对糖尿病的分型标准，所有病例无心脑血管病变，无急性和慢性感染。DN组病例根据尿中微量白蛋白水平进行确诊。DPN的诊断符合《中国糖尿病防治指南》制定的DPN诊断标准，并且所有病历排除其它原因导致的周围神经病变。
2、实验方法。
2.1、记录对象的一般资料，晨起空腹抽取静脉血2ml，分离血清于-20℃保存备用。
2.2、应用ELISA方法在相同条件下测定各组血清样品中TNF-α水平。
2.3、用全自动生化分析仪检测常规指标空腹血糖(FBG)、尿微量白蛋白(mA1b)及尿总蛋白(UP)。
2.4、抽取2ml全血，密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，提取总RNA，用real-timePCR检测TNF-α、IL-12和MCP-1mRNA盼表达。
3、统计学方法采用Excel和SPSS13.0统计学软件进行数据处理分析，数据以平均值±标准差表示，均数用t检验、单一因素用直线相关分析，P＜0.05为有统计学意义。
结果:
1、血清中常规指标:空腹血糖(FBG)正常对照(NC)组为5.18±0.55mmol/L，糖尿病(DM)组为10.32±3.35 mmol/L，糖尿病肾病(DN)组为9.60±3.05 mmol/L，糖尿病周围神经病变(DPN)组为7.70±2.61mmol/L，糖尿病肾病合并糖尿病周围神经病变(DN+DPN)组为14.70±3.89mmol/L。DM组、DN组、DPN组和DN+DPN组均显著高于NC组，DN+DPN组显著高于DM组。
2、尿微量白蛋白（mA1b）:NC组为9.53±4.18mg/L，DM组为14.06±12.12mg/L，DN组为166.14±133.55 mg/L，DPN组为12.65±10.93 mg/L，DN+DPN组为462.70±308.36 mg/L。DN组和DN+DPN组均显著高于NC组。DN组和DN+DPN组均显著高于DM组。
3、尿总蛋白(UP):NC组为0.07±0.02g/24h，DM组为0.12±0.07g/24h，DN组为1.60±1.42g/24h，DPN组为0.35±0.88g/24h，DN+DPN组为0.28±0.23g/24h。DN组显著高于NC组和DM组。
4、血清中TNF-α的水平:NC组为8.15±3.00pg/ml，DM组为8.14±3.40pg/ml，DN组为7.35±1.63 pg/ml，DPN组为6.44±1.93 pg/ml，DN+DPN组为6.81±3.93 pg/ml。与NC组和DM组比较，DN组、DPN组和DN+DPN组均无显著差异。
5、单个核细胞TNF-α、MCP-1和IL-12mRNA表达:Real-time PCR检测结果显示，各实验组TNF-α mRNA的相对表达值NC组为0.89±0.22，DM组为0.63±0.29，DN组为1.43±0.60，DPN组为1.56±0.34，DN+DPN组为1.10±0.31。与正常对照组比较，DN组和DPN组均有统计学意义。与DM组比较，DN组和DPN组均有统计学意义。各实验组MCP-1mRNA的相对表达值NC组为1.10±0.21，DM组为4.34±2.09，DN组为11.52±5.53，DPN组为14.75±4.36，DN+DPN组为3.09±0.37。DN组和DPN组显著高于NC组。DN组和DPN组显著高于DM组。各实验组IL-12mRNA的相对表达值NC组为1.32±0.65，DM组为0.28±0.26，DN组为3.31±2.18，DPN组为7.42±2.77，DN+DPN组为5.29±4.32。与正常对照组比较，DPN组和DN+DPN组均有统计学意义。与糖尿病组(DM)比较，三组均有显著差异。
6、血清中TNF-α与常规指标的相关分析:在DN组，血清TNF-α与FBG有相关性，并且呈正相关。
结论:
1、TNF-α和IL-12mRNA的表达水平在糖尿病肾病和糖尿病周围神经病变患者中均明显升高。
2、MCP-1的表达水平在糖尿病与糖尿病周围神经病变患者中均明显升高。
3、在DN组中，血清TNF-α与FBG呈正相关关系。