亚硝酸盐胁迫下植物乳酸杆菌WU14中GlnR与Nir相互作用表达及调控机制

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kelly_0810
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研究发现的亚硝酸盐还原酶类型分别是:nrfA,nasB,nirK,nirS。至今为止,食品级安全菌株乳酸菌产生的亚硝酸盐还原酶的研究是降解亚硝酸盐,解决环境中亚硝酸盐污染的重要举措。本研究中通过研究一株新型产亚硝酸盐还原酶菌株Lactobacillus plantarum WU14,根据四种亚硝酸盐还原酶基因的保守序列进行比对,利用互联网相关蛋白分析软件及生物信息学工具,以 WU14全基因组为模板扩增出WU14中亚硝酸盐还原酶基因长度为1.6kb,并且进行TA克隆,构建Nir诱导表达载体并在大肠杆菌中成功表达并纯化大小为62KDa。  GlnR是一种全局性氮源调控蛋白有MerR家族与OmpR家族两种类型,在氮源代谢调节过程及分子调控水平上至关重要。研究中根据NCBI中提供的L actobacillus plantarum全基因组数据,扩增Lactobacillus plantarum WU14中GlnR蛋白基因长度为400bp,并且利用互联网相关蛋白分析软件及生物信息学工具分析蛋白结构及特性证实为MerR家族,运用IPTG作为诱导剂诱导GlnR蛋白表达大小为14KDa。  实验中运用细菌单杂交技术进行GlnR蛋白与Nir基因在以大肠杆菌为宿主菌进行体内结合实验,研究中表明Lactobacillus plantarum WU14中表达的GlnR蛋白与Nir基因可以结合。在荧光定量 PCR实验中,16sRNA基因为内部参考基因,进行GlnR基因与 Nir基因在不同浓度亚硝酸盐胁迫下,转录表达情况。确定在低浓度的亚硝酸盐胁迫下GlnR对Nir基因产生正调控,Nir基因转录量增加,致使亚硝酸盐还原酶的量增加。但是在逐渐增加亚硝酸盐浓度后GlnR基因与Nir基因的转录量明显降低。
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