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转基因克隆动物是在获得转基因细胞系的基础上进行体细胞克隆（体细胞核移植）,生产具有特定性状、特殊功能或者一定目的的克隆动物群。近十年来,转基因技术与体细胞克隆技术的结合使转基因动物的生产有了突飞猛进的发展。转基因克隆动物在生产人类重要的医药蛋白、培育抗病品系、异种器官移植以及基因治疗等方面都显示出了广阔的应用前景。确定外源基因的整合位点及拷贝数是对外源基因下一步表型研究和整合机理探讨的前提条件。本实验首先分析了转人溶菌酶基因克隆牛中外源基因的整合位点及拷贝数,并分析了转基因个体整合位点的纯合性。本实验得到结果如下:1.应用TAIL-PCR、DWACP-PCR和旁侧PCR方法得到了2头转基因克隆牛外源基因的整合位点,结果表明2个转基因个体中外源基因均以单一位点形式整合在受体基因组上,得到两个整合位点即4个结合片段。2.0504个体外源基因整合在牛的24号染色体的基因组克隆（NW003104566.1）中。外源基因整合造成染色体约238bp的核苷酸缺失,外源基因3′端有约3103bp核苷酸的缺失且整合位点处富含AT序列。2个整合片段的末端与拓扑异构酶I作用位点的共有序列相连。外源基因与染色体的整合连接处存在短的同源序列。3.Yun个体中外源基因整合在牛的16号染色体的基因组克隆（NW003104440.1）中,整合位点位于LOC10030基因和RGL1基因之间。外源基因的整合造成染色体约228bp的核苷酸缺失,外源基因3′端同样缺失约3103bp的核苷酸。整合位点连接处同样导致个别碱基的缺失。2个整合片段的末端与拓扑异构酶I作用位点的共有序列相连。并且外源基因与染色体的整合连接处存在短的同源序列。4.本实验以GAPDH基因为内参,采用绝对定量PCR法检测外源基因拷贝数。标准曲线为:Log2N （拷贝数） = -0. 3075△Ct+0.7421 （R2=0.9996, p<0.001）,计算得到4头原代转基因克隆牛外源基因拷贝数分别为1.335883、1.234408、1.169825、1.0127,说明外源基因基本以单拷贝形式整合到受体基因组上。5.采用整合位点5′上游和3′下游侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合,进行旁侧PCR,分析整合位点的纯合性。检测到转基因克隆牛与野生型牛一致的侧翼序列特异性引物扩增片段,表明2头转基因克隆牛均为整合位点杂合子。