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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus，wssv)，自1992年爆发以来，已在世界范围内传播开来，给对虾养殖业造成巨大经济损失，至今仍未得到完全控制，是迄今为止危害最为严重的一种对虾病毒，成为目前对虾养殖业可持续发展的主要障碍之一。为了研究其致病机理，以便更有效的防治，本论文用siRNA、dsRNA和几种免疫刺激物，注入凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)内体，研究siRNA~IdsRNA引发的RNAi作用以及非特异dsRNA可能引起的先天免疫反应。选用WSSV核苷酸还原酶基因小亚基(ribonucleotide reductase small subunit，RR2)和囊膜蛋白VP28基因设计特异性的siRNA；选择WSSV DNA聚合酶基因(DNA polymerase．DNApol)、核苷酸还原酶基因小亚基(RR2)、胸苷激酶基因(thymidylate kinase，TK)、衣壳蛋白VP24基因和囊膜蛋白VP28基因设计特异性的长链dsRNA；绿色荧光蛋白基因(green fluorescence protein，GFP)，虾酚氧化酶基因(prophenoloxidase，PO)用来设计非特异性长链dsRNA；几种免疫刺激物分别为poly(I：C)，poly(C：G)，polyC，CL097和ODN2006。
本实验分为两个部分，分别为siRNA和长链dsRNA介导的RNA干扰。siRNA实验选择9组凡纳滨对虾分别作为实验组和对照组，实验组分别注射siRNA+WSSV病毒液，并于24、36 hr分别加注射一次siRNA；PBS和WSSV病毒液作为对照组。观察对虾死亡率并分别在12，24，36，48，72 hr采样，进行荧光定量PCR测定病毒量及半定量RT-PCR检测基因表达量。长链dsRNA介导RNAi试验选择13组凡纳滨对虾分别作为实验组和对照组，实验组分别注射dsRNA+WSSV病毒液，免疫刺激物+WSSV病毒液，PBS和WSSV病毒液作为对照组。观察死亡率并分别在6，12，24，48，72 hr采样，进行荧光定量PCR检测病毒量。
结果表明，特异性的siRNA能显著的降低目的基因的表达量和WSSV扩增速度，并对延缓对虾死亡时间起到一定作用，效果随着注射量的增加而加强；而非特异性的siRNA对于抗WSSV并无作用。另外，特异性dsRNA能显著降低WSSV扩增量并提高攻毒虾的存活率，保护率达到50﹪～80﹪；与siRNA不同，非特异dsRNA也有保护作用，如dsRNA类似物Poly(I：C)及Poly(C：G)，保护率在40﹪～50﹪之间；非特异dsRNA保护率在20﹪～40﹪之间；其他免疫刺激物(CL097、ODN2006、PolyC)，保护率在17﹪芹右；定量PCR检测各组病毒量趋势也是一样。由此可见，非特异dsRNA，可能存在引起对虾先天免疫的反应，为研究对虾先天免疫的机制打下基础。