【摘 要】
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目的:设计特异性切割HIF-1αmRNA的锤头状核酶,构建核酶、底物的体外及真核表达载体,研究其在体外及细胞内的切割活性,为抗HIF-1αmRNA核酶应用于肿瘤的基因治疗奠定基础.方
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目的:设计特异性切割HIF-1αmRNA的锤头状核酶,构建核酶、底物的体外及真核表达载体,研究其在体外及细胞内的切割活性,为抗HIF-1αmRNA核酶应用于肿瘤的基因治疗奠定基础.方法:利用软件分析并预测HIF-1αmRNA二级结构,选择合适的核酶作用靶点,设计并合成核酶及底物的cDNA序列,分别克隆到pSP72、pSUPER、phRL-LUC表达载体上.体外失控转录出核酶及底物,进行体外切割实验.利用脂质体介导的共转染技术,将核酶和底物表达载体共转染到293T细胞中,通过双荧光报告基因系统检测细胞内核酶的活性.结果:测序鉴定克降成功,体外及细胞内实验结果显示,抗HIF-1αmRNA核酶在体外及细胞内均能有效切割底物.结论:成功构建抗HIF-1αmRNA核酶及底物的体外及真核表达载体,体外及细胞内实验结果证明抗HIF-1αmRNA核酶将成为肿瘤基因治疗的手段.
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