【摘 要】
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目的利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速检测日本血吸虫( Schistosoma japonicum)感染性钉螺、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)
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目的利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速检测日本血吸虫( Schistosoma japonicum)感染性钉螺、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)的研究。方法以日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的特异基因为靶序列,利用PrimerExplorer V3软件分别设计扩增靶基因的4条LAMP引物,酚氯仿法分别提取三种病原体的DNA,取适量模板DNA加入配制并优化好的LAMP反应体系,65℃下60 min,完成对靶病原体基因的扩增,通过肉眼观察、SYBR Green I染色及电泳来判定扩增结果。LAMP扩增产物经酶切进一步鉴定;设立对照组评价特异性;10倍系列稀释模板检测LAMP敏感性。结果模板经LAMP扩增后,肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物;三种病原体LAMP扩增产物经相应限制性内切酶酶切鉴定正确;结果显示三种病原体LAMP检测方法特异;LAMP可检测到日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的敏感性分别是1pgDNA/μL,1pgDNA/μl,1.5个疟原虫/107RBC ,高于或与PCR敏感性相当。结论建立了日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫特异、敏感和快速的LAMP检测方法。
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