【摘 要】
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该文首先从正常人胚胎肺细胞中提取了细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,再以此为模板进行PCR,得到了编码成熟p21的cDNA.该cDNA用EcoRl、BamHl双酶切后,回收含p21基因的长约500
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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该文首先从正常人胚胎肺细胞中提取了细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,再以此为模板进行PCR,得到了编码成熟p21的cDNA.该cDNA用EcoRl、BamHl双酶切后,回收含p21基因的长约500bp的DNA片段,插入经EcoRl、BamHl双酶切的pUC18载体中,进行序列分析,结果与国外报道的序列一致.随后,作者将p21和p53的cDNA分别克隆至真核表达载体pMSCVneo,得到重组质粒pMS21和pMS53,再用脂质体(Lipofectamine或Lipofectin)转染肺癌细胞株A549.经G418筛选,得到抗生素集落:pMS21转染的S549形成集落的数目明显少于空载体pMSCV转染的A549;而pMS53转染的A549形成的集落数目只比pMSCV转染的略少一些.作者用RNA狭缝杂交实验和免疫细胞化学实验从转录和翻译水平充分证实了上述结果分别是p21、p53表达所致.为了进一步观察p21的抑瘤作用,作者把pMS21转染的A549皮下注射至裸鼠体内,同时以注射pMSCV转染的A549细胞的裸鼠作为对照.经过两个半月的观察,发现对照组全部长出肿瘤而实验组却没有.该实验通过对p21抑瘤功能的研究为以后进一步研究p21的作用机理以及肿瘤的抑癌基因疗法奠定了基础.
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