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目的:原发性肝癌是常见且凶险的恶性肿瘤之一,其发病率位居肿瘤第五位,相关死亡率位于第三位。肝癌发生发展是多基因、多因素相互协调作用的多阶段过程,其发生机制目前尚未完全阐明。因此,有必要深入研究肝癌分子生物学机制,寻找潜在的干预靶点。CFIm25是转录前修饰中选择性多聚腺苷酸化的“关键”因子,CFIm25的抑制可显著促进近端poly(A)位点剪切,逃逸负性调控以促进细胞增殖和转化。目前CFIm25只在神经胶质细胞瘤等极少疾病中有所研究,在肝癌中尚无研究报道。本研究拟探讨CFIm25在肝癌增殖及侵袭转移中的作用及分子机制。方法:通过实时定量PCR(RT-q PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫组织化学(IHC)的方法检测人肝癌及其癌旁组织中CFIm25的表达,并分析CFIm25的表达与肝癌手术病人临床病理特征及预后之间的关系;采用小干扰RNA片段(si RNA)沉默CFIm25表达;同时使用真核过表达载体质粒建立CFIm25过表达细胞株;通过平板克隆和CCK8实验检测高/低表达CFIm25后对肝癌细胞增殖能力的影响;而Transwell侵袭迁移实验和细胞划痕实验用于检测高/低表达CFIm25后对肝癌细胞侵袭转移的影响;裸鼠皮下移植瘤及尾静脉注射转移瘤模型分别用于观察体内CFIm25对肝癌细胞增殖及侵袭转移的作用;流式细胞术、F-actin染色分别检验高/低表达CFIm25后细胞周期、细胞骨架变化;RT-PCR、Western blot、荧光素酶报告基因等实验方法用于检验CFIm25对肝癌细胞增殖和侵袭转移的影响分子机制研究。结果:RT-PCR结果显示:相比于癌旁组织(2.22±0.38),肝癌组织(1.42±0.28)中CFIm25的表达水平明显下降(n=62,p<0.01);Western blot结果显示:癌旁组织的印记灰度明显强于肝癌组织;免疫组织化学染色结果显示:CFIm25表达定位于细胞核,且相比于癌旁组织,肝癌组织中细胞排列极不规则,细胞核大,CFIm25染色深度明显弱于癌旁组织。结合肝癌病人临床病理特征分析,CFIm25的表达与肝癌的TNM分期(p<0.05)及淋巴结转移(p<0.05)密切相关。CFIm25高表达组(中位生存时间为35个月)生存时间明显高于CFIm25低表达组(中位生存时间为15个月)。CFIm25在高转移潜能细胞株Sk-hep-1(0.57±0.02)、HCC-LM3(0.15±0.11)中低表达,而在低转移潜能的细胞株SMMC-7721(1.47±0.09)、Hep G2(2.00±0.02)中高表达。在高表达CFIm25的SMMC-7721中抑制CFIm25的表达后,利用CCK8实验检测其增殖,结果显示:si RNA组(si CFIm25-1:1.90±0.02,si CFIm25-2:1.827±0.02)的增殖高于NC组(1.21±0.03),抑制CFIm25的表达后可使细胞增殖活力明显增强(NC VS si CFIm25-1,p<0.001;NC VS si CFIm25-2,p<0.001),随后利用平板克隆实验验证,所得结果与CCK8实验结果趋势一致。在高表达CFIm25的SMMC-7721中抑制CFIm25的表达后,使用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,结果显示:si RNA组(si CFIm25-1:65.33±1.45,si CFIm25-2:74.67±1.35)穿出Transwell小室的细胞明显多于NC组(19.67±0.88),抑制CFIm25的表达后可使细胞侵袭能力明显增强(NC VS si CFIm25-1,p<0.0001;NC VS si CFIm25-2,p<0.0001),利用Transwell迁移实验、细胞划痕验证,所得结果与Transwell侵袭实验结果趋势一致。以上实验,均在高表达CFIm25的Hep G2中重复,所得结果与SMMC-7721趋势相同。CCK8、平板克隆、Transwell及划痕实验同样在过表达CFIm25的Sk-hep-1、HCC-LM3中验证,细胞增殖和侵袭转移的变化与在SMMC-7721中抑制CFIm25相反。在裸鼠皮下移植瘤模型中,结果显示:相比于对照组(59.98±8.62),Sk-hep-1过表达CFIm25组(28.80±4.817)皮下移植瘤的体积明显较小(p<0.05);利用HCC-LM3细胞重复实验,得到趋势一致的结果。在尾静脉注射转移瘤模型中:相比于对照组(3.333±0.8819),Sk-hep-1过表达CFIm25组肝脏转移瘤数(1.167±0.30736)明显较少(p<0.05);相比于对照组(2.167±0.4773),Sk-hep-1过表达CFIm25组肺脏的转移瘤数(0.333±0.2108)明显较少(p<0.01);利用HCC-LM3细胞重复实验,实验结果与之一致。进一步的研究结果显示:RT-PCR检测在Sk-hep-1中过表达CFIm25后,周期蛋白D1(CCND1)及细胞周期依赖性激酶4(CDK4)的表达,结果显示:相比于对照组(1.01±0.05),过表达CFIm25组(0.41±0.01)的CCND1的表达明显减少(p<0.001);相比于对照组(1.00±0.04),过表达CFIm25组(0.51±0.02)的CDK4的表达明显减少(p<0.001);在利用Western blot检测CCND1及CDK4的表达时,结果与RT-PCR结果呈相同趋势。利用流式细胞术检测Sk-hep-1中过表达CFIm25后细胞周期变化,结果显示:相比于对照组(57.73±0.74),过表达CFIm25组(73.41±1.12)的处于G1期的细胞明显增多(p<0.001);S期细胞变化趋势与G1期相反。相同的实验方法用于在SMMC-7721抑制CFIm25后,CCND1和CDK4及细胞周期的变化趋势与在Sk-hep-1中过表达CFIm25相反。在分析CFIm25与肝癌细胞上皮间质细胞转化(EMT)的过程中发现:RT-PCR检测在Sk-hep-1中过表达CFIm25后EMT关键因子E-cadherin及N-cadherin的表达,结果显示:相比于对照组(1.02±0.04),过表达CFIm25组(3.58±0.21)的E-cadherin的表达明显增多(p<0.001);相比于对照组(1.02±0.04),过表达CFIm25组(0.47±0.03)的N-cadherin的表达明显减少(p<0.001);在利用Western blot检测E-cadherin及N-cadherin的表达时,其结果与RT-PCR结果趋势相同。进一步的研究显示:抑制CFIm25可使细胞中点状F-actin转变为束状F-actin,并紧密排列到细胞周边,细胞在束状F-actin的拉力下,胞体收缩,并伸出伪足,细胞因此具有间质细胞特性,易于转移;而在过表达CFIm25后,细胞中更多束状F-actin转变为点状F-actin,散在分布于细胞内,细胞的间质表型消失。在对信号通路的研究中显示:过表达CFIm25后,可降低JNK/c-Jun和P38的磷酸化水平,而CFIm25抑制后则出现JNK/c-Jun和P38磷酸化水平升高。在Sk-hep-1中过表达CFIm25后,使用荧光素酶报告基因检测AP-1的转录活性,结果显示:相比于对照组(11.09±0.24),过表达CFIm25组(5.58±0.28)的转录活性降低(p<0.001);相同的实验方法用在SMMC-7721抑制CFIm25后,AP-1的转录活性变化趋势与在Sk-hep-1中过表达CFIm25相反。结论:CFIm25在人肝癌呈负相关关系,且与肝癌病人的TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关。CFIm25可在细胞水平及动物水平上抑制肝癌的增殖及侵袭转移。CFIm25可促进细胞G1期阻滞以调控细胞周期。CFIm25通过EMT关键因子E-cadherin的表达,引起F-actin重排,改变细胞骨架,从而抑制肝癌细胞EMT。CFIm25抑制肝癌细胞的增殖侵袭转移是通过抑制JNK/c-Jun和P38 MAPK信号通路,以抑制转录因子AP-1的活性引起的。