水稻温敏不育相关基因RNAi和过表达载体的构建及遗传转化

来源 :海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hantao2007
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本实验室于2002年用具有明显育性转换特征的水稻温敏核雄性不育系Tb7S为材料,通过抑制性削减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization,SSH)技术筛选减数分裂期的Tb7S幼穗在高温可育和低温不育条件下的差异表达cDNA片段。经SSH富集cDNA片段构建了两个cDNA质粒文库,即Tb7S可育幼穗和不育幼穗的cDNA消减文库。并从可育幼穗cDNA消减文库随机挑取39克隆进行测序,但没有进行ReverseNorthernDot-blot鉴定。 本研究选取上述39个克隆中的37个克隆进行ReverseNorthernDot-blot鉴定,剔除假阳性后,共获得11个差异较明显的阳性克隆。 根据ReverseNorthernDot-blot鉴定的结果,选取差异表达最明显的基因作为转化水稻的目的基因。将选取基因的序列在水稻全长cDNA数据库进行比对,选取与其他水稻基因连续相同的碱基数不超过21个的一段序列作为RNAi干涉片段,并根据这段序列设计RNAi引物,克隆这些基因和RNAi片段。测序表明,已经成功克隆到RNAi片段RiOs243、RiOs183、RiOs371.、RiOs408和基因Os348、Os371、Os183。 选用pTCK303作为实施RNA干涉和过表达策略的植物表达载体,将RNAi片段进行两次酶切连接,分两次连接到载体中,第一次正向连入,第二次反向连入,构建成RNAi植物表达载体pTCK303-RiOs243、pTCK303-RiOs183、pTCK303-RiOs371、pTCK303-RiOs408。将基因Os348、Os371、Os183进行一次酶切连接,连入过表达载体中,构建成过表达载体pTCK303-Os348、pTCK303-Os371.、pTCK303-Os183。 构建完成的RNAi和过表达载体通过农杆菌介导方法转化水稻,经共培养、选择培养、分化培养后得到6株pTCK303-Os371载体转化的T0代植株。提取转化植株的DNA,进行PCR检测,4株扩增出目的条带,结果证明基因Os371已经整合到水稻基因组中。
其他文献
《媒介教育论》已由中国传媒大学出版社出版。读书作为中国媒介教育首部系统的理论著作,在考察和解读国外主要国家媒介教育实践和理论基础上,从中国媒介产业、教育事业和社会
近日,在开展“为民服务创先争优”活动中,北京市邮政公司西区邮局在对外服务窗口的广大党员中开展“三亮”“三创”“三评”活动,推动党员在提升服务水平中发挥先锋模范作用,
AIM To treated with electrochemotherapy(ECT) a prospective case series of patients with liver cirrhosis and Vp3-Vp4- portal vein tumor thrombus(PVTT) from hepat
本刊讯(记者丁全利)入汛以来,南方部分省份出现持续强降雨天气,引发洪涝地质灾害并造成严重灾情险情.对此,中央领导同志作出重要指示批示.收到中央领导同志重要指示批示后,自
期刊
徐州空军学院党委积极适应使命任务要求,着眼推进教育训练信息化转型建设,瞄准制约科学发展长远建设的基础性、深层次瓶颈问题,狠抓学习型党委建设,促进了治校办学水平和人才
用什么语言描述2009年丽江基层党建?注重实际。这一年,丽江市立足民族地区实际,因地制宜,结合各族群众的愿望、需求和民族地区的特点、优势抓党建,促进团结、维护稳定、构建
各省、自治区、直辖市人民政府,国务院各部委、各直属机构:rn建设自由贸易试验区(以下简称自贸试验区)是党中央、国务院在新时代推进改革开放的一项战略举措,肩负着为全面深
期刊
本文研究了一类仅跟踪误差可量测不确定非线性系统的全局输出反馈实际跟踪问题.不同于现有文献,该控制系统具有依赖于不可测状态的增长且增长率为未知常数,并且只要求被跟踪
我想说说我的父亲,但我决定还是从母亲说起.rn前天打电话回家,向母亲问起老家房子装修的事.母亲说大哥的房子瓷砖马上就要贴好,但是水泥不够了,还得接着买.然后母亲要求,我和
朝阳区现有律师事务所480家,从业律师7300余名,其中律师党员1995人,占全市律师党员的40%。2008年1月,新成立的朝阳区律师党委按照“摸清底数、健全组织、开展活动、发挥作用