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家蚕的驯化已有千年历史,在漫长的驯化过程中,家蚕不仅仅作为泌丝织绸的经济物种,也是一种文化符号影响了千百年来的华夏文明。然而,蚕病所带来的危害却一直影响着整个蚕桑产业的发展,我国每年约有近百亿左右的经济损失是由于各种蚕病造成的。近年的研究表明,当家蚕感染微生物后,家蚕体内经过一系列复杂的信号调控通路产生出多种抗微生物的多肽以应对微生物的入侵。其中,主要通过Toll和Imd两个重要的信号调控通路来进行微生物入侵危险信号的传导以及激活抗菌肽表达,从而进行体液免疫防御。我们通过对家蚕免疫相关Toll信号通路中关键基因：髓样分化因子88(Myeloid Differentiation factor88)的研究,探索家蚕体液免疫的信号传导的调控机制,并取得以下结果：1.家蚕BmMyD88基因的克隆及序列分析基于家蚕基因组数据库,克隆获得了家蚕BmMyD88基因的cDNA序列,基因全长1188bp,编码395个氨基酸,分子量为45kD,等电点为6.54。该蛋白结构上含有两个功能区域：N端的死亡结构域(death domain),以及C端的TIR结构域(Toll/IL-IR domain, TIR)同源性比对表明,家蚕BmMyD88蛋白与果蝇、埃及伊蚊、人类等,都具有较高的相似性,尤其是在两个功能结构域内,同源性较高。全基因组基因芯片表明,BmMyD88在家蚕的各个组织中表达量均很低,微生物感染后基因芯片也表明,在受到病原侵袭后,BmMyD88表达也未受诱导发生变化,维持较低的水平。通过RT-PCR以及荧光定量PCR结果也进一步验证了芯片数据。2.家蚕BmMyD88基因的原核表达以及多克隆抗体的制备根据基因cDNA序列,设计引物分别扩增了全长和TIR结构域,并且将其分别克隆到pEGX 4T-1和pET-28a表达载体中,构建重组质粒。将重组后的质粒转化进入Rosetta菌株中,经过IPTG诱导,全长蛋白以上清形式表达,TIR结构域重组蛋白以包涵体形式表达.经过亲和层析,获得纯化的TIR结构域蛋白,并将蛋白免疫成年公兔,制备多克隆抗体。3. Western blotting检测家蚕BmMyD88蛋白的表达利用制备的多克隆抗体,对家蚕微生物诱导24h的脂肪体、中肠的蛋白进行检测。结果显示,家蚕脂肪体、中肠中均可以检测到目的蛋白的表达,但微生物诱导状态与正常状态下相比,除黑胸败血菌诱导下中肠组织中表达量有下调外,其他菌种诱导均未使蛋白表达量发生明显变化。