论文部分内容阅读
目的: 观察大鼠骨髓源性内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)对雪旺细胞(Sehwann Cells，SCs)增殖能力的影响，及黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)对其干预的影响。 方法: (1)麻醉后处死Wistar大鼠，分离出股骨、胫骨、胸骨、肱骨，除去结缔组织，剪去骨骺端，从骨髓腔的一端将骨髓从另一端冲出。大鼠骨髓利用密度梯度离心技术分离出单个核细胞后进行诱导培养，观察并记录细胞形态变化，培养至第7d，收集贴壁细胞，备用。激光共聚焦显微鉴定细胞，对DiI-acLDL吞噬及FITC-UEA-1结合双阳性为EPCs，流式细胞仪进一步鉴定细胞。 (2)用不同浓度的APS(0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml)干预培养EPCs24小时，检测EPCs数量和增殖情况。选用浓度为0.4mg/ml的APS干预培养EPCs不同时间(0h、6h、12h、24h、48h)，检测EPCs数量和增殖情况。 (3)将购买的雪旺细胞株适应性培养并传代至生长对数期，收集SCs。用上述不同浓度的APS干预培养SCs24小时，MTT法检测SCs增殖情况。选用浓度为0.4mg/ml的APS干预培养SCs上述不同时间，检测SCs增殖情况。 (4)将EPCs接种在Transwell小室内与SCs建立共培养体系，设立SCs空白对照组，EPCs与SCs共培养0h、6h、12h、24h、48h不同时间，MTT法检测SCs的增殖情况。 (5)加入各浓度的APS干预共培养体系，用MTT法检测SCs增殖情况;采用浓度为0.4mg/ml的APS干预共培养体系不同的时间，用MTT法检测SCs增殖情况。 结果: (1)大鼠骨髓利用密度梯度离心法分离单个核细胞培养7天，激光共聚焦显微观察DiI-acLDL吞噬及FITC-UEA-1结合双阳性;流式细胞仪检测细胞VEGFR-2/CD34、VEGFR-2/CD133表达的阳性率，证实为EPCs。 (2)APS对大鼠骨髓源性EPCs的数量和增殖能力的影响:APS能明显增加大鼠骨髓源性EPCs的数量和增殖能力，呈一定的量效与时效关系，在浓度为0.1mg/ml时较对照组增强(P＜0.05)，0.4mg/ml时达高峰(P＜0.01)。0.4mg/ml的APS干预12h其影响较对照组明显增强(P＜0.01)，24h达到最佳效应，48h时略有下降，但仍明显高于对照组(P＜0.01)。 (3)APS对SCs增殖能力的影响:APS能明显增加SCs增殖能力，呈一定的量效与时效关系，在浓度为0.05mg/ml时较对照组增强(P＜0.05)，0.4mg/ml时达高峰(P＜0.01)。0.4mg/ml的APS干预6h，其增殖能力开始增强(P＜0.05)，24h达到最佳效应，48h略有下降，但仍明显高于对照组（P＜0.01）。 (4)EPCs对SCs增殖的影响:EPCs能明显增强SCs增殖能力，在共培养6h SCs增殖能力开始增强(P＜0.05)，12h～24h时间段SCs增殖能力呈时间依赖性增强(P＜0.01)，24h达到最佳效应，48h略有下降，但仍明显高于对照组(P＜0.01)。 (5)APS干预共培养体系，对SCs增殖能力的影响:APS明显增强共培养体系中SCs的增殖能力，呈一定的量效与时效关系，其增殖能力在浓度为0.05mg/ml时开始增强(P＜0.05)，0.4mg/ml时达高峰。0.4mg/ml的APS干预共培养体系，6小时SCs增殖能力开始增强（P＜0.05），24h达到最佳效应，48h略有下降，但仍明显高于对照组(P＜0.01)。 结论: (1)大鼠骨髓利用密度梯度离心技术分离出单个核细胞后进行诱导培养，细胞经鉴定证实为EPCs，为后期试验顺利进行奠定了基础。 (2)APS能明显增加EPCs的数量和增殖能力，呈一定的浓度和时间依赖性。 (3)APS能明显增强SCs的增殖能力，呈一定的浓度和时间依赖性。 (4)EPCs能增强SCs增殖能力，呈时间依赖性，其机制可能与EPCs旁分泌各种细胞因子有关。 (5)APS干预EPCs能显著增强SCs增殖能力，呈一定的浓度和时间依赖性，其机制可能与增强了EPCs旁分泌各种细胞因子有关。