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鳗弧菌是危害我国水产养殖业的主要病原菌.本文采用分子生物学,免疫学和膜片钳等技术,研究养殖鱼类-大菱鲆(Scophthalmus maximus),在受到病原菌感染后,SNARE蛋白和钾离子通道参与免疫应答防御机制的调控作用。通过腹腔注射半致死剂量的鳗弧菌,研究受感染的大菱鲆在感染初期所诱发的一系列应激反应。通过鉴定外周血液白细胞的吞噬和杀灭鳗弧菌的活性,以及外周血、脾脏和头肾白细胞所发生的呼吸爆发的活性,血清中细胞因子-白介素1β的含量的变化,研究抗鳗弧菌的先天性免疫应答防御机制。结果发现在感染24hr后,白细胞吞噬鳗弧菌的百分数从47.25%增加到61.18%,吞噬鳗弧菌的指数从4.68增加到5.62;杀菌活性从1.26增加到1.73;呼吸爆发活性OD600值从0.07增加到0.2;比较外周血、脾脏和头肾白细胞三种组织所发生的呼吸爆发的活性发现,脾脏白细胞的呼吸爆发活性最高,头肾略高于血液,感染8hr后呼吸爆发活性平均大于1.7;血清中细胞因子-白介素1β的OD490值从正常鱼对照的0.0523±0.014增长到感染24hr的最大值0.47±0.033,感染24 hr后的表达量大约是未感染对照的9倍,感染后增加量显著(p<0.05)。进一步证明感染初期先天性免疫应答防御在保护鱼体中的重要作用。SNARE蛋白是一种参与调控所有真核生物细胞分泌和胞吐的膜蛋白。为了测定SNARE蛋白是否也参与大菱鲆白细胞的分泌和胞吐,首先通过RT-PCR方法鉴定大菱鲆体内存在的SNARE蛋白,设计两种SNARE蛋白(v-SNARE,VAMP-2和t-SNARE,SNAP-25)基因的引物,从外周血白细胞和脑组织中都克隆出SNAREs蛋白中的VAMP-2的cDNA,而SNAP-25的cDNA仅从脑组织中克隆出。经过序列分析发现,大菱鲆的VAMP-2基因与多数哺乳动物的VAMP-2基因同源性在80%以上,而氨基酸序列的同源性在90.6%以上;大菱鲆SNAP-25基因与多数哺乳动物的SNAP-25基因也在83%以上,氨基酸序列的同源性在89%以上。结果表明这两种SNARE蛋白在大菱鲆体内也是非常保守。为了证明SNARE蛋白是否参与调控大菱鲆白细胞细胞因子白介素-1β的分泌,研究分泌调控蛋白-SNAREs在大菱鲆先天性免疫应答过程中的作用。通过RT-PCR,免疫印迹,免疫组化技术克隆了大菱鲆VAMP-2基因,并研究了其在细胞因子白细胞介素-1β分泌中的调控作用。