用cDNA代表性差异分析克隆白血病细胞HL-60凋亡相关基因

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凋亡在肿瘤研究中的重要性已经得到公认。近几年的研究揭示了许多凋亡分子机制及其基因凋控机制,如Caspases、线粒体在凋亡信号转导途径中的重要作用,Bcl-2家族对凋亡的调控等,使我们对这一过程有了更深入的了解。然而,仍有许多问题诸如其精确的生化调控机制、更多的凋亡相关基因等都有待于我们更深一步的研究。 cDNA代表性差异分析(cDNA RDA)技术是近几年发展起来的一种成熟的基因表达差异分析方法,与传统消减杂交、DD-PCR等差异分析技术相比,具有快速、高效、敏感、特异、稳定等优点。它的基本原理是将实验组(Tester)和对照组(Driver)的cDNA经过酶切后,连接上引物连接头,通过PCR扩增获得可代表cDNA组成复杂性的cDNA扩增产物(cDNA amplicon),然后通过两者的若干轮消减杂交、PCR富集,得到经过动力学富集的差异表达基因片段。这个方法已经经过文献的成功应用,并分离到了许多有意义的功能基因。 我们选用cDNA RDA技术,分析药物诱导HL-60细胞凋亡前后基因表达的差异,试图通过这个手段克隆到新的凋亡相关基因。 首先,我们用细胞有丝分裂阻滞药物Nocodazole诱导出了HL-60细胞典型的凋亡过程,建立了一个新的HL-60细胞凋亡模型。Nocodazole可以
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