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原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一。尽管临床诊断水平及外科技术不断提高，但由于肝癌具有高的侵袭转移能力，肝切除后发生复发转移率高，致使肝癌的整体治疗水平并未取得显著改善，肝癌病人的5年生存率至今仍无显著提高。大量的资料显示肝癌术后的主要死因是复发转移。因此，深入研究肝癌复发转移的分子机制，探索防治肝癌复发转移的手段，对进一步提高肝癌整体治疗水平具有重要意义。Ets变异体2（ets variant2，ETV2）又称ER71/Etsrp，是Ets家族PEA3亚家族成员之一。最早是在斑马鱼胚胎中被发现，后期研究发现ETV2广泛表达于哺乳动物胚胎中。在斑马鱼胚胎敲除ETV2导致胚胎无法形成有功能的血管。ETV2-/-小鼠卵黄囊无法形成血管结构。ETV2-/-胚胎鼠因血管缺失无法生长发育而死亡。鉴于血管生成是影响HCC复发转移的一个关键因素，提示ETV2可能在肝癌复发转移过程中发挥了十分重要的作用。本课题旨在研究ETV2在肝癌细胞系和肝癌组织样本中的表达情况，分析ETV2与肝癌临床病理特征的相关性，并结合病例随访资料探讨ETV2表达与肝癌预后的关系。研究结果显示： ㈠ETV2 mRNA和蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织和肝癌细胞系中均呈低表达。采用实时定量Real-time PCR技术检测了30例肝癌组织(HCC)及其相应的邻近非癌肝组织(Adjacent Non-tumorous LiverTissue，ANLT)中的ETV2 mRNA表达水平。随后，我们又采用半定量RT-PCR检测了同一批组织标本HCC和ANLT中的ETV2 mRNA表达水平。同时检测了正常肝细胞系L02及四种肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、MHCC97-L、HCCLM3中ETV2 mRNA的表达水平。Real-time PCR结果显示，与邻近非癌肝组织(ANLT)比较，ETV2在肝癌组织(HCC)中呈显著低表达（0.485±0.01，P＜0.05）。将正常肝细胞系LO2中ETV2 mRNA表达量设为1，结果显示SMMC7721、HepG2、MHCC97-L和HCCLM3细胞系中ETV2 mRNA的相对表达量分别为0.03±0.01、0.065±0.02、0.06±0.016、0.01±0.007，差异有统计学意义(任意一组肝癌细胞系和LO2之间P＜0.05)，表明ETV2在肝癌细胞系中呈显著低表达。进一步用Western-blot检测同一批组织标本HCC和ANLT中ETV2蛋白表达水平，结果显示，ETV2蛋白在肝癌组织(HCC)中的表达水平显著低于邻近非癌肝组织(ANLT)(0.12±0.02 vs.0.96±0.13，P＜0.05)。用Western-blot检测正常肝细胞系LO2和肝癌细胞系SMMC7721、HepG2、MHCC97-L及HCCLM3中ETV2蛋白表达水平，以正常肝细胞系LO2作对照。结果显示在上述肝癌细胞系的蛋白表达水平分别为0.26±0.02、0.36±0.04、0.30±0.03、0.21±0.02，差异均有统计学意义(任意一组肝癌细胞系和LO2之间P＜0.05)，表明肝癌细胞系中ETV2蛋白表达水平显著低于正常肝细胞系。 ㈡ETV2低表达与肝癌临床病理特征及生存预后密切相关。为了研究ETV2表达水平与肝癌临床病理特征及生存预后的关系，我们采用免疫组化法检测99例肝癌组织标本中ETV2的表达水平。根据免疫组化检测结果，我们将99例肝癌患者分为ETV2高表达组（56例）与低表达组(43例)，分析ETV2表达水平与肝癌临床病理特征和预后的关联。结果显示，ETV2表达水平与肿瘤结节数目(P=0.001)、有无包膜(P=0.001)、有无静脉浸润(P=0.001)、巴塞罗那分期(P=0.008）及Edmondson-Steiner分级(P=0.001)密切相关。生存结果分析显示，ETV2低表达组中位总体生存时间为18.0月，高表达组为48.0月;ETV2低表达组中位无瘤生存时间为15.1月，高表达组为40.0月。表明ETV2低表达组的总体生存时间和无瘤生存时间均显著低于ETV2高表达组(P＜0.001)。与此同时，为了分析不同肝癌类型对肝细胞癌生存率的影响，我们又作进一步作分层研究。将99例肝癌分为SHCC（小肝癌）、SLHCC（孤立性大肝癌）和NHCC（结节性肝癌）三个亚组，分析比较三个亚组的总体生存时间和无瘤生存时间的差异。结果显示，SLHCC、SHCC和NHCC组的中位总体生存时间分别为为42.0月，40.0月和12.0月; SLHCC、SHCC和NHCC组的中位无瘤生存时间分别为41.0月，39.0月和10.0月，经统计学分析显示:SHCC组和SLHCC组总体生存时间和无瘤生存时间均显著高于NHCC组(P=0.001);而SHCC组和SLHCC组的总体生存时间(P=0.633)和无瘤生存时间(P=0.423)则无明显差异。继之，我们采用Cox风险回归模型对肝癌患者的临床特征和ETV2表达水平进行单因素分析和多因素分析。单因素分析显示肿瘤结节数目(P=0.001)、有无包膜(P=0.001)、静脉浸润(P=0.001)，巴塞罗那分期(P=0.001)、Edmondson-Steiner分级(P=0.015)、ETV2表达水平(P=0.001)是影响肝癌患者预后的危险因素;进一步多因素分析显示肿瘤结节数目(P=0.026)、静脉浸润(P=0.006)及ETV2表达水平(P=0.021)是影响肝癌患者预后的独立危险因素。根据以上研究结果我们得出以下结论:ETV2在肝癌组织及肝癌细胞系中呈一致性的显著低表达。ETV2的表达水平、肿瘤结节数目、有无静脉浸润与肝癌的生存预后密切相关，是肝癌预后的独立危险因素。