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第一部分小鼠肠癌RNA转染mIL-12修饰的树突状细胞诱发特异性CTL的研究目的:研究小鼠结肠癌细胞CT-26 RNA体外转染mIL-12基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC),观察其诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)能力方法:小鼠骨髓细胞体外以rmGM-CSF、rmIL-4诱导培养获取DC,流式细胞仪检测纯度;293细胞扩增携带mIL-12基因的重组腺病毒,体外转染DC;Trizol法提取CT-26细胞总RNA,应用TransMessenger体外转染mIL-12基因修饰的DC;ELISA法检测细胞上清及小鼠血液中mIL-12水平,LDH释放法检测小鼠体内特异性CTL活性。结果:小鼠骨髓细胞经诱导培养后,获得大量高纯度的DC,流式细胞仪检测CD11c+的DC > 90%;携带mIL-12基因重组腺病毒转染的DC细胞高表达mIL-12;CT-26细胞总RNA体外转染mIL-12基因修饰的DC后,回输小鼠,能明显提高小鼠体内mIL-12的水平并可以诱导体内生成较高水平的CTL活性,而以RNA转染Ad-LacZ修饰DCs后的对照组及RNA转染DC的对照组,可诱导机体生成中等水平的特异性CTL活性,DC、PBS对照组则均未诱导机体生成特异性CTL活性。结论:小鼠肿瘤总RNA转染mIL-12基因修饰的树突状细胞后,免疫接种小鼠,可提高小鼠体内mIL-12的水平,并能有效诱导机体产生较高水平的特异性CTL活性。第二部分小鼠肠癌RNA转染mIL-12修饰树突状细胞激发抗肿瘤活性研究目的:研究以小鼠结肠癌细胞CT-26 RNA作为抗原物质,体外转染mIL-12基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC),观察其激发特异性抗肿瘤效应。方法:小鼠骨髓细胞体外以rmGM-CSF、rmIL-4诱导培养获取树突状细胞,流式细胞仪检测纯度;293细胞扩增携带mIL-12基因的重组腺病毒,体外转染树突状细胞;Trizol法提取CT-26细胞总RNA,应用TransMessenger体外转染mIL-12基因修饰的树突状细胞,免疫接种小鼠。ELISA法检测细胞上清及小鼠血液中mIL-12水平,LDH释放法检测小鼠体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果:小鼠骨髓细胞经诱导培养后,获得大量高纯度的树突状细胞,流式细胞仪检测CD11c+的树突状细胞> 90%;提取的CT-26细胞总RNA体外经TransMessenger介导,转染mIL-12基因修饰的树突状细胞后,回输小鼠,可以诱导体内生成较高水平的特异性CTL活性,亲本肿瘤接种后小鼠100%长期存活,而以该RNA转染Ad-LacZ修饰DC后的对照组及RNA转染DC的对照组,诱导机体生成的特异性CTL活性显著低于实验组(P<0.01),亲本肿瘤接种后小鼠60%长期存活,DC、PBS对照组则均未诱导机体生成特异性CTL活性,小鼠无长期存活。结论:小鼠树突状细胞经小鼠肠癌CT26细胞总RNA转染后,进一步以mIL-12基因修饰,免疫接种小鼠,可在体内有效提呈肿瘤抗原,诱导机体产生高水平的CTL,更有效地激发特异性抗肿瘤免疫效应。