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[目的]本研究拟采用单通道膜片钳实验技术研究视网膜动脉平滑肌细胞(retinal artery smooth muscle cells,RASMCs)的大电导钙激活钾离子(large conductance Ca2+-activated K+channel,BK)通道的特点,探讨二十二碳六烯酸(docosahexenoic,DHA)对其电流的影响,并采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)及逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)探讨DHA对RASMCs的BK通道的β1亚基的影响,以阐述BK单通道的特点及DHA对BK通道激活的作用机制。[方法](1)内向外型单通道膜片钳技术记录正常视网膜动脉平滑肌细胞BK单通道电流,并计算开放概率(NPo);(2)膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度DHA灌流后BK通道的NPo的变化;(3)Western Blot及RT-PCR分别测定对照组、低剂量DHA组和高剂量DHA组RASMCs的BK通道β1亚单位的蛋白及基因表达的改变。[结果](1)在膜片钳实验单通道模式下:在电极外液钙离子浓度为1μmol/L下,刺激电位分别为OmV、20mV、40mV、60mV、80mV和100mV时,BK通道 NPo 分别为(0.0001土0)、(0.0041±0)、(0.0386±0.0002)、(0.0625±0.0003)、(0.4577±0.0032)和(1.7040±0.0383),随着刺激电位的增加,BK通道的NPo升高,差异有统计学意义(F=45.6825,P<0.05);在刺激电位为60mV下,电极外液钙离子浓度分别为 Omol/L、0.01mol/L、0.1mol/L、1mol/L、10mol/L 和100mol/L 条件下,BK 通道 NPo 分别为 0、(0.0030±0)、(0.0100±0.0032)、(0.0432±0.0030)、(0.6363±0.0251)和(3.0847±0.1187),随着钙离子浓度的升高,BK通道的NPo升高,差异有统计学意义(F=43.7799,P<0.05);(2)在刺激电压60mV和电极外液钙离子浓度为1μmol/L条件下,DHA浓度为Oμmol/L、1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L、7.5μmol/L 和 10μmol/L 时,BK 通道 NPo 分别为(0.0444±0.0012)、(0.0812土0.0042)、(0.2090±0.0061)、(0.3105土0.0053)、(0.4650±0.0078)和(0.4977±0.0145),随着 DHA 浓度的升高,BK 通道的 NP0增加,差异有统计学意义(F=252.6885,P<0.05);(3)BK通道β1亚基蛋白的相对表量在对照组、低剂量DHA组和高剂量DHA组3组RASMCs中分别为(0.8753±0.0120)、(1.0361±0.0037)和(1.0005±0.0032),差异无统计学意义(F=1.1772,P>0.05),BK通道β1亚基mRNA的相对表达量在对照组、低剂量DHA组和高剂量DHA组3组RASMCs中分别为(1.1312±0.0179)、(1.2202±0.0428)和(1.2028±0.0623),差异无统计学意义(F=0.3797,P>0.05)。[结论](1)BK通道NP0随着刺激电位和钙离子浓度的升高而增加,具有电压依赖性和钙离子依赖性;(2)DHA可使BK通道的电流增加,但是未能增加BK通道的β1亚基蛋白和基因表达升高,DHA可能是通过直接激活的机制激活BK通道。