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淀粉酶是一类重要的工业淀粉加工用酶,是淀粉原料加工工业的基础,其中α-淀粉酶是一种十分重要的淀粉酶。α-淀粉酶存在于动植物和微生物中,是一种生物界广泛分布的酶。芽孢杆菌是产淀粉酶微生物中研究最深入的“细胞工厂”。本论文实验拟确定本实验室保存的解淀粉芽孢杆菌BH072菌株中α-淀粉酶的存在,进而研究其理化性质,克隆其基因,为菌株的工业化利用奠定基础。本实验以解淀粉芽孢杆菌BH072为α-淀粉酶产生菌株,通过硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析和Native-PAGE凝胶电泳回收等方法,分离纯化出了分子量为68kDa,具有淀粉分解活性的淀粉酶。将纯化淀粉酶进行酶学性质的分析研究,确定该淀粉酶是一种最适pH为6.5,最适温度65℃的中温酸性淀粉酶;pH5.5-9.0范围稳定,表现良好耐热性,并且其为非钙离子依赖型淀粉酶,表面活性剂对该酶活性有轻微抑制作用,丝氨酸蛋白抑制剂有促进作用。分析其水解产物,并通过比较它与商品α-淀粉酶的水解效果,确定其为比商品α-淀粉酶对可溶性淀粉水解效果更好的α-淀粉酶。该淀粉酶有较好生淀粉水解能力。通过部分氨基酸序列分析,确定其为解淀粉芽孢杆菌BH072全基因组中预测α-淀粉酶基因表达的α-淀粉酶。为了研究解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶的分子基础,在对前期发表的该菌株基因组序列进行生物信息学分析的基础上,构建了pET-28a(+)-amy072异源表达系统进行异源表达。对纯化重组酶酶学性质的鉴定,进一步验证了所得分离纯化的野生型α-淀粉酶的基因序列。基于基因序列分析了解淀粉芽孢杆菌BH072菌株的遗传进化,预测其二级结构并建立了解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶的的3D结构模型,在分子水平解释了其酶学特性。本论文建立了解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶分离纯化技术,对该酶的理化特性进行了系统研究,克隆表达了α-淀粉酶的基因,并分析了其基因序列,为该菌株的开发利用奠定了基础。