EB病毒转化人B细胞相关基因的SSH分析

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Epstein-Barr病毒(EBV)为疱疹病毒科的成员.综在全世界各地都有分布,为95﹪以上的成人所携带,该病毒是传染性单核细胞增多症的病原,尤为重要的是,由于它与中国南方发病率相当高的鼻咽癌,以及非洲儿童淋巴瘤的发生有密切关系,被世界卫生组织研究癌症的国际机构列为致癌物.该研究采用抑制性消减杂交(Suppression Subtractive hybridization, SSH),构建EB病毒感染B淋巴细胞(实验组)与正常B细胞间(正常组)差异表达的cDNA消减文库.将获得的顺向和逆向cDNA消减文库与cGEM-T easy vector连接,转化大肠杆菌JM109蓝白斑筛选和菌落PCR筛选有插入片段的克隆,随机挑取顺向(10个)和逆向(6个)阳性克隆测序,并在Genbank中进行同源性比较,根据获得的EST序列设计引物,分别以实验组和正常组RNA为模板进行RT-PCR,验证获得的阳性EST.结果:在EB病毒感染B细胞的cDNA消减文库获得3个不同的表达基因,这些基因均与一些人类肿瘤相关.在正常B细胞的cDNA文库中,未获得能够抑制EBV表达的基因.
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