论文部分内容阅读
长春碱是从夹竹桃科植物长春花(Catharanthus roseus)中分离得到的一种具有抗癌活性的生物碱。从70年代起,长春碱开始被应用于临床治疗肿瘤,主要用于治疗何杰金氏病、乳腺癌、非小细胞性肺癌等。临床上应用的长春碱被制成硫酸长春碱(vinblastine sulfate, VBLS)注射剂,水溶性虽然有所改善,但是仍然存在着半衰期短,神经系统和胃肠道系统毒性强的缺点。应用于研究生命现象的纳米技术被称为纳米生物技术,它是纳米技术和生物学的结合。纳米材料因其粒径的改变而获得一系列特性,如量子尺寸效应、小尺寸效应、表面和界面效应。纳米微粒的尺寸一般比生物体内的细胞小得多,这就为生物学研究提供了一个新的研究途径。纳米药物载体是目前纳米生物技术的重要研究领域,主要应用于抗肿瘤等药物的靶向或局部给药制剂。本课题利用纳米生物技术改造VBLS,在降低其毒副作用的同时,增加药物靶向性、提高生物利用度,使VBLS成为更有效的抗癌药物。本课题针对VBLS临床应用毒副作用大,无靶向性的缺点,利用去溶剂法制备VBLS纳米靶向注射制剂。课题内容包括利用中心点试验设计法(Central Composite Designs, CCD)优化牛血清白蛋白(BSA)制备纳米粒工艺,运用微观检测手段检测白蛋白纳米粒(BSANP)的各项物理特性,并研究了叶酸-白蛋白-硫酸长春碱(FA-BSANP-VBLS)靶向制剂体外释放性质及稳定性。通过体外PC-3癌细胞系MTT实验和细胞凋亡实验对纳米靶向注射制剂做功能分析。以此获得具有优良稳定性、高生物利用度、肿瘤靶向性的VBLS纳米注射制剂及其相应的制备工艺和质量控制标准。本研究得出：1.制备粒径为150 nm BSANP的最优实验条件为：BSA浓度3.21 mg/mL,乙醇加入速率2.96 mL/min,乙醇量4.23 mL,交联度20%。得到的BSANP表面活性氨基数为668.973nmol/mg。原子力显微镜(Atomic Force Microscope, AFM)观察发现得到的BSANP形状规则,粒径与激光粒度仪测定结果相符合。2.在一定程度上可以通过控制加入交联剂戊二醛的量来控制BSANP表面剩余活性氨基数量,从而控制偶联上的叶酸量。在用本实验中优化得到的BSANP制备FA-BSANP时,有383.996μmol叶酸偶联到BSANP上。3.用三组粒径不同的FA-BSANP和不同比例的VBLS:FA-BSANP做实验发现,粒径越大,包封率和载药量越大。在粒径相同时,随着VBLS:FA-BSANP比例的增加,包封率和载药量也增加。粒径为156.6 nm时(优化组),最大包封率和载药量分别为86.93%和44.24%。4.添加甘露醇的FA-BSANP-VBLS冻干粉用去离子水复溶后放于4℃储存,48 h后可见溶液稳定,无分层或浑浊现象。5.FA-BSANP-VBLS在最初的12h内药物传递系统出现突释,之后缓慢释放至56 h,分别释放出所含VBLS的30%和80%。软件拟合发现该药物传递系统符合一级释放动力模型,更进一步证明了FA-BSANP-VBLS的缓释特性。6.FA-BSANP-VBLS的抗癌活性实验VBLS原药组、FA-BSANP-VBLS组和BSANP-VBLS组相比,FA-BSANP-VBLS组细胞凋亡率最高,且BSANP-VBLS组和FA-BSANP-VBLS组细胞凋亡图上均有缓释特征。通过以上实验结果,证明本实验所制备的FA-BSAN-VBLS粒径大小达到纳米级别,粒径分布均匀,形状规整,并且抗癌活性明显提高,为进一步探索该载药系统在体内的靶向性、活性和代谢规律提供了前期实验基础。