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研究背景人工关节置换被广泛用于缓解疼痛和改善患者的生活质量。随着人口的老龄化,初次人工全髋关节和人工全膝关节置换的数量被预测将在2030年增加到现在数量的174%-673%。然而,隐性失血(Hidden Blood Loss,HBL)在关节置换术后经常发生,如人工髋膝关节置换术后。有研究报道称THA围手术期的隐性失血量达到了总失血量的30%。,此外在一髋部骨折的病例分析中发现在纠正脱水等造成的偏倚后,计算后的隐性失血量为547ml to 1473ml。此外由于止血带的运用,全膝人工关节置换(Total knee arthroplasty,TKA)术中出血量通常非常小,可以忽略不计。而TKA围手术期间显性出血量约等于术中出血量与术后引流管引流量之和。但研究发现,膝关节置换术后伤口引流量仅为总失血量的50%(依据术前术后红细胞压积差,通过Gross方程计算得到)。而这种不明原因导致的血红蛋白含量下降就是所谓的隐性失血,其造成的急性贫血和输血率的增加是外科医生主要关心的问题之一。然而隐性失血的发生机制尚不明确,之前有研究认为研究认为血液中脂肪小滴转变而来的游离脂肪酸造成的红细胞和血红蛋白氧化应激损伤可能是隐性失血的主要机制之一。此外,抗氧化剂术中与术后的应用则被认为可以保护并减少红细胞和血红蛋白所受到的氧化应激损伤。与此一致的是我们先前的研究在动物模型上证明了游离脂肪酸可以通过氧化应激导致红细胞和血红蛋白的损伤。作为从葡萄籽中提取出来的一种天然抗氧化剂,原花青素(PA)具有较强的生物学活性,原花青素与胡萝卜素b、维生素C、E等相比表现出来更强的对于DNA和脂质氧化等抗氧化应激保护作用。原花青素作为一种安全又有效的抗氧化还原剂被广泛用于多种器官缺血再灌注损伤,恶性肿瘤扩散,胃肠功能紊乱,帕金森症和阿尔兹海默症的治疗。富氢水作为一种新型抗氧化剂,同样已在动物模型上被用于预防和治疗氧化应激相关疾病。富氢水已被证明可以选择性的强力清除氧自由基。从而保护细胞减少氧化应激损伤。考虑到氧化应激在隐性失血机制中的可能作用,同时原花青素和富氢水能否减轻这种氧化应激损伤还有待研究,所以本研究的目的是通过测量血红蛋白含量、红细胞计数、SOD、GSH-PX、MDA和ferryl血红蛋白含量来评估和比较原花青素和富氢水的作用。方法将实验小鼠分为四组,处理方法如下所述,且药物使用的剂量则根据查阅文献所得的常规剂量。1.对照组在饲喂普通饮用水2周后通过尾静脉注射20%乙醇0.5ml。2.LIN(亚油酸)在饲喂普通饮用水2周后通过尾静脉注射溶有60mmol/亚油酸的20%乙醇溶液。3.LIN+PA组在饲喂含有原花青素100mg/kg的普通饮用水2周后通过尾静脉注射溶有60mmol/亚油酸的20%乙醇溶液。4.LIN+HW组每日饲喂富氢水2周后通过尾静脉注射溶有60mmol/亚油酸的20%乙醇溶液。在此期间,每日观察小鼠并称重一到六次直到实验结束。所以小鼠均为出现不适反应。分别在注射后24、48、72小时后在麻醉下从小鼠眼静脉获取血标本。红细胞计数,血红蛋白含量及红细胞比容在标本采集后即使用血常规检测仪进行检测,红细胞形态学检查在染色后使用显微镜进行观察。剩余血液标本则在离心后取上清存在零下80度等待后续的生物化学检测。MDA、T-SOD、和GSH-PX通过分光光度法进行检测。其吸光度值分别在波长为532nm、550nm和412nm时测出。所有检测均在25度温度下进行。结果两部分实验的结果变化趋势基本相同,均成功构建了隐性失血动物模型,且原花青素和富氢水均能有效缓解亚油酸导致的红细胞氧化应激损伤。四组间小鼠的体重和小鼠的饮水量之前无明显差异。在亚油酸注射之前,四组小鼠的红细胞计数和血红蛋白含量未见明显差异,而注射0.5ml(60mmol/l)亚油酸后三组注射小鼠与对照组小鼠的红细胞计数和血红蛋白含量相比明显下降,表明成功构建了隐性失血模型。而LIN+PA组和LIN+HW组与LIN组比较后我们发现,在注射24h之后血红蛋白含量和红细胞计数均有不同程度下降,其中LIN组,红细胞计数和血红蛋白含量分别下降了 0.66±0.34× l012/L,16.3±8.25g/L,而在LIN+PA组,分别下降了 0.35±0.1 × 1012/L,9.1±4.01g/L.两组之间有明显差异(P<0.05).在注射后48小时,两组之间的差异依然有显著性。此外,LIN+HW组在注射24小时后血红蛋白含量和红细胞计数分别下降了 0.45±0.22 ×1012/L,10.7±3.56g/L。在注射 48 小时后下降值(0.72±0.23 × 1012/L,18.2±5.85 g/L)与LIN组(1.15±0.48× 1012/L,25.7±8.38g/L)相比有显著性差异。同时氧化还原指标的检测结果显示,LIN组SOD和GSH-PX活力值在注射24小时后与注射前显著下降,且在48小时达到最低值,在注射后72小时有轻度上调。LIN+PA组和LIN+HW组在上述两个指标上也表现出相同的变化趋势,然而在各时间点LIN+PA组和LIN+HW组的SOD和GSH-PX活力值均明显高于LIN组。而MDA值在LIN组在注射后24小时达到峰值,然后逐渐降低。LIN+PA组和LIN+HW组也表现出了相同的变化趋势。而在各时间点LIN+PA组和LIN+HW组的MDA值始终低于LIN组。红细胞的形态学观察通过与对照组对比后发现在注射后可以看见一部分红细胞出现皱缩变形甚至破裂,且在注射后24小时表现最为明显。此在在LIN+PA组和LIN+HW组我们依然可以看见少量皱缩变形的红细胞,但很难发现破裂的红细胞。结论原花青素和富氢水均可以在小鼠隐性失血模型上通过减少红细胞的氧化应激损伤来减少隐性失血的量。表明它们有可能作为一种新型的治疗方法用于临床上隐性失血的预防和治疗。