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猪细小病毒(Porcince parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,感染妊娠前期的母猪后主要引起母猪流产、胚胎死亡、胎儿畸形、木乃伊化、弱胎及不孕等危害,给养猪业造成了重大损失。本研究对泰安地区的散养猪场随机进行血清学调查,调查PPV的感染和流行情况;对采集的临床猪病料进行分离鉴定,以确定发病原因,了解PPV的病原学特征;对分离得到的PPV进行克隆测序分析,分析病毒的分子生物学特征,为我国PPV的研究积累宝贵的资料。本研究对泰安地区的散养猪场进行血清学调查,通过乳胶凝集试验,发现在该地区的猪场中,100份血清样品有34份是阳性,PPV的血清阳性率达34%,而经产母猪和后备母猪的血清学阳性的样品分别有18份和9份,阳性率分别是36%和30%,种公猪血清学阳性样品有7份,阳性率为35%,结果表明该地区猪场PPV感染率较高。对从临床流产胎儿病例中采取的20份病料(心、肝、肾、肺、脑)利用PK-15细胞对PPV进行分离鉴定,在PK-15细胞上产生病变的病料有4份,将这4份病料进行包括理化性质鉴定、红细胞血凝谱实验和特异性试验在内的常规病毒学鉴定和PCR鉴定。分离出的病毒耐脂溶剂,耐酸,耐热,对胰酶不敏感;能很好的凝集豚鼠、猫、大鼠、小鼠和鸡的红细胞,不能凝集牛和猪的红细胞,8单位的抗PPV抗体可以使待检病毒的HA效价降低8倍以上,说明对所分离的病毒HA有特异性的抑制作用。PCR扩增出1740bp的目的片段,以上结果都表明分离出的病毒是PPV,PCR扩增更是证明分离出的病毒是同一株。把从病料中分离出来的PPV命名为PPV泰安株(PPV-TA),根据GeneBank上已公布的PPV序列分别设计合成了PPV的NS1基因和VP2基因的特异性引物,对PPV-TA进行PCR扩增,得到2个PCR产物,分别将这两个PCR产物连接pMD18-T载体,进行克隆测序分析。通过分析得知PPV-TA NS1基因长1989bp,编码662个氨基酸,与参考PPV NS1基因核苷酸同源性在98.3%～99.9%之间。糖基化位点是356NLS、446NFS、513NLT,磷酸化位点是Thr435和Ser473,与参考毒株相同。PPV-TA VP2基因长1740bp,编码579个氨基酸,与PPV参考毒株VP2基因核苷酸同源性在98.3%～99.8%之间,决定PPV的组织嗜性的位点位于378、383、436位,与PPV NADL-2株和PPV china株相同。VP2蛋白有9个线性抗原为点,分别是21-GNESGGGGGGGGG-33,168-DLTASLMVALDTNNT-182,239-HSDIMFYTIENAVPIHLLRTGD-260,310-ANTRKGYHQTINNSYT-325,326-EATAIRPAQVGYNTPYM-342,367-DEPNGAIRFTMDYQHGH-383,376-TMDYQHGHLTTSS-388,385-TTSSQELERYTFNPQ-399,437-NMHFMNTLNTYGPLTAL-453,与PPV NADL-2株和PPV china株完全相同。PPV-TA株的NS1基因和VP2基因均相对保守,但也产生了一些新变化,说明不同毒株的生物学特性还是有差异的,丰富了我国PPV的分子流行病学和病原学材料。