【摘 要】
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本实验应用转化PF4基因及从16、17氨基酸位点的剪切体PF4基因的减毒沙门氏菌SL3261,通过口服途径研究对小鼠全身致死性照射的保护作用.本题选用雄性6-8周Balb/c小鼠作为研究
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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本实验应用转化PF4基因及从16、17氨基酸位点的剪切体PF4<,17-70>基因的减毒沙门氏菌SL3261,通过口服途径研究对小鼠全身致死性照射的保护作用.本题选用雄性6-8周Balb/c小鼠作为研究对象,进行以下七方面工作:①照射后小鼠7、14天外周血象的检测.②照射后小鼠7、14天骨髓集落培养.③照射后小鼠双侧股骨的骨髓单个核细胞(MMNCs)计数.④流式检测照射后各组小鼠骨髓c-kit,scal-1双标细胞数.⑤照射后各组小鼠生存期的比较.⑥荧光显微镜检测绿色荧光蛋白在小鼠体内的表达.⑦PCR方法检测外源基因在小鼠组织器官的整合.结论:本研究首次证明以减毒的沙门氏菌株SL3261为载体通过口服途径PF4和PF4<,17-70>基因可以保护小鼠免受致死量的全身照射损伤,促进外周血及骨髓造血恢复,延长照射后小鼠的生存期,通过绿色荧光显微镜检测发现在小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、骨髓及外周血均有绿色荧光蛋白的表达,说明通过口服途径细菌分布于全身各组织器官,PCR检测发现减毒沙门氏菌可以将外源基因整合到体细胞内起到治疗效果,而且没有明显的毒副作用.这种特征使它能够适合于作为放疗保护制剂应用,尤其是对于放射治疗导致骨髓衰竭的病人.本实验通过口服携带人的PF4<,17-70>基因片段的SL3261减毒菌株,研究抗肿瘤血管新生在恶性黑色素瘤治疗中的作用.本题选用雌性6-8周C57BL/6小鼠作为研究对象,进行了以下的研究工作:①各组小鼠肿瘤体积的比较②照射后各组小鼠生存期的比较③荧光显微镜检测绿色荧光蛋白在小鼠体内的表达④PCR检测外源基因在小鼠组织器官的整合⑤免疫组化检测肿瘤内微血管密度的区别⑥肿瘤原位凋亡检测⑦PF4<,17-70>质粒转染B16恶性黑色素瘤细胞系流式分析细胞的凋亡率.讨论通过口服途径,减毒沙门氏菌可以作为基因治疗的载体,介导外源PF4<,17-70>基因在小鼠组织细胞中的有效整合及表达.减毒菌株在肿瘤组织内聚集,将PF4<,17-70>释放到肿瘤组织内,抑制肿瘤的血管新生,从而抑制肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期.这些研究表明减毒菌株的靶向性及PF4<,17-70>的抗肿瘤血管新生作用相结合可以达到更好的抗肿瘤效果.
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