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本试验以平邑甜茶（MalushupehensisRehd）、M7(MaluspumilavarparadisiacaSchneid)、嘎拉（Malusdomestica）鲁加5号(Malusdomestica)的茎尖为外植体，获得了无菌试管苗;以试管苗叶片为外植体诱导出愈伤组织;以愈伤组织和试管苗叶片为外植体建立了离体再生体系;以试管苗叶片为酶解材料，对原生质体分离和培养技术进行了系统研究。主要结果如下:
1.苹果外植体快繁体系的建立
1)苹果无菌试管苗的获得:适合平邑甜茶和鲁加5号茎尖初代培养的培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L，适合M7和嘎拉茎尖初代培养的培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;适合平邑甜茶继代增殖的培养基为MS+BA0.3mg/L+IBA0.03mg/L，适合M7、嘎拉和鲁加5号继代增殖的培养基为MS+BA0.3mg/L+IBA(NAA)0.03mg/L。
2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化:适合平邑甜茶和M7叶片愈伤组织诱导的培养基是MS+IBA1.0mg/L+BA0.5mg/L，适合嘎拉叶片愈伤组织诱导的培养基是MS+IBA1.0mg/L+BA0.5mg/L。IBA+BA组合诱导愈伤组织的效果优于2，4-D+BA组合。适合M7愈伤组织分化不定芽的培养基为MS+TDZ2.0mg/L+NAA0.2mg/L。各种细胞分裂素诱导愈伤组织分化不定芽的效果依次为TDZ、BA、KT。
3)叶片不定芽分化:以平邑甜茶和M7为试验试材，研究了叶片暗处理时间、叶片不同接种方式和不同植物生长调节剂对叶片分化不定芽的影响。结果表明叶片最佳暗培养时间为14d，两种基因型均以远轴面接触培养基再生效果好，其中平邑甜茶在两种接种方式下叶片再生率和再生芽数差异显著;M7在两种接种方式下叶片再生率和再生芽数差异不显著。适合平邑甜茶叶片不定芽分化的培养基为MS+BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L，适合M7叶片不定芽分化的培养基为MS+BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L。
4)生根培养:以平邑甜茶和M7为试验试材，发现不同植物生长调节剂和浓度对生根率有重要影响。适合平邑甜茶生根的最佳培养基为1/2MS+IBA0.1mg/L，适合M7生根的最佳培养基是1/2MS+IBA1.0mg/L。30-40d的生根苗驯化后移栽成活率达80％以上。
2.原生质体的分离和培养技术的建立
1)苹果叶片原生质体分离体系的优化:选取试管苗顶部1-3片展开叶，酶解前用13％甘露醇CPW盐溶液质壁分离预处理60-90min，酶液为纤维素酶Cellulase-OnzukaR-100.8％+果胶酶Pectinse0.5％+PVP1％+MES0.1％+甘露醇0.65mol/L，溶于CPW液后，调pH至5.6-5.8，在26℃黑暗条件下先静止酶解9h，然后进行振荡酶解6h，转速为50rpm，此条件下获得的原生质体产量和活力最高。
2)原生质体培养体系的优化:以改良MT+BA1.0mg/L+2，4-D0.2mg/L+甘露醇6.5％+Vc5mg/L+Glu500mg/L+CH100mg/L+ME500mg/L+Arg50mg/L为原生质体培养基，培养密度为1×105(个/ml)，对原生质体进行固液双层培养。培养3-4d后出现第一次分裂，2w分裂3-5次，平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团，两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织。鲁加5号和M7均只形成7-10个细胞的细胞团，嘎拉未见细胞分裂。