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目的观察促黑素(α-MSH)对Raw264.7细胞诱导破骨细胞形成及信号传导通路的影响,并通过阐明其作用机制,寻找α-MSH影响破骨细胞形成的关键靶点。方法1.RT-PCR方法测定Raw264.7细胞表达的黑皮质素受体的种类。2.Raw264.7细胞分成空白对照组、核因子KB受体活化因子配体(RANKL)组、α-MSH组和RANKL加α-MSH组,分别处理细胞,培养6天后经抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)染色观察破骨细胞形成数目,同时分别测定各组酸性磷酸酶活性。3.利用α-MSH及其类似物处理体外培养的Raw264.7细胞,分为α-MSH组、SHU9119组、α-MSH加SHU9119组、PT141组和THIQ组,培养6天后经TRAP染色观察破骨细胞形成数目。4.利用免疫印迹法(Western blot)观察经RANL、α-MSH和RANKL加α-MSH分别处理Raw264.7细胞0min、15min和60min后,p-JNK蛋白的表达情况。结果1.RT-PCR结果显示Raw264.7细胞表达MC1R～MC5R;2. RANKL组和RANKL加α-MSH组均可见大量破骨细胞形成,且RANKL加α-MSH组破骨细胞形成数目较RANKL组显著增多(p<0.05)；3.利用不同浓度的α-MSH(10-6M～10-10M)处理Raw264.7细胞,结果显示α-MSH可增加破骨细胞形成,且该增长趋势呈剂量依赖性；4.利用α-MSH及其类似物SHU9119.PT141、THIQ分别处理Raw264.7细胞,结果显示α-MSH组和SHU9119组均能明显增加破骨细胞形成数目,甚至SHU9119加α-MSH组较前两组更加显著得增加了破骨细胞形成(p<0.05)；PT141组可显著增加破骨细胞形成数目(p<0.05),但与α-MSH组相比无统计学意义(p>0.05)；THIQ组与RANKL组比较破骨细胞形成无显著性差异(p>0.05)；5.酸性磷酸酶活性测定：RANKL组和RANKL加α-MSH组酸性磷酸酶活性较空白对照组和α-MSH组均明显增高(p<0.05),但此两组之间比较未见明显差异(p>0.05)；6. Western blot结果显示,α-MSH组和RANKL加α-MSH组与RANKL组相比较,p-JNK蛋白表达明显增加。结论α-MSH显著增加破骨细胞形成,可能与MC1R和/或MC5R结合,通过JNK信号通路促进破骨前细胞融合而增加破骨细胞形成。