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结肠癌是消化道常见肿瘤，在西方国家，结肠癌在肿瘤致死的病因中居第二位，仅次于肺癌。在中国，近20年来，结肠癌的发病率不断上升，结肠癌与肺癌及乳腺癌成为中国增长最快的三种肿瘤，目前其发病率已达60/10万人口，死亡率近8/10万人口。大多数结肠癌患者就诊时都是中晚期，结肠癌细胞已发生转移，因此单纯外科手术切除对中晚期结肠癌患者达不到根治的效果，必须辅以化疗。但迄今为止，大多数化疗药的疗效有限，目前临床上结肠癌疗效最好的联合化疗方案其有效率也不到50﹪，而且，在这些不到50﹪有效的结肠癌患者中，在化疗缓解停用化疗药一段时间后，大部分又复发，究其原因是因为结肠癌细胞对化疗药产生了多药耐药性(Multi-drug Resistance，MDR)。
肿瘤细胞经典的MDR与一种分子量为170kDa的膜糖蛋白，P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的过表达有关。P-gp能将化疗药转运出细胞而降低细胞内化疗药的累积浓度。P-gp的过表达已被证实与结肠癌细胞的MlDR有关。
为提高结肠癌治疗中的化疗效果，一个主要的问题是如何逆转结肠癌细胞的多药耐药性。以往的研究发现钙拮抗剂如维拉帕米、反义寡核苷酸及锤头核糖酶等能降低细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达水平从而部分逆转肿瘤细胞MDR1/P0-gp依赖的多药耐药性。但钙拮抗剂存在导致心衰及低血压等心血管副作用，而反义寡核苷酸和锤头核糖酶的临床应用价值还未得到完全证实。因此，仍有待寻找新的方法来逆转肿瘤细胞的多药耐药性。
近年发现的一种抑制特异基因表达的新方法是采用RNA干扰(RNA克隆细胞中，IC<,50>从0.358μmol/L降低至0.023p.mol/L，与对照亲本细胞相比，降低14.57倍；在稳定表达＃4123 MDR1 siRNA的克隆细胞中，IC<,50>从0.358μmol/L降低至0.0351.μmol/L，与对照亲本细胞相比，降低9.22倍。COLO 320DM结肠癌亲本细胞及各克隆细胞用5-Fu、Adriamycin及Vineristine处理后细胞动力学分析细胞动力学分析表明，用抗肿瘤药处理前，COLO 320DM结肠癌亲本细胞及各克隆细胞的PI/AI无显著差异。用抗肿瘤药处理后，各组细胞PI/AI均显著降低，而且用5-Fu处理后，Clone＃4029及Clone＃4123细胞的PI/AI由COLO320DM亲本细胞PI/AI的5.95下降至3.45及3.51；用Adriamycin处理后，Clone＃4029及Clone＃4123细胞的PI/AI由COLO 320DM亲本细胞PI/AI的5.68下降至2.74及2.75;用Vincristine处理后，Clone＃4029及Clone＃4123细胞的PI/AI由COLO 320DM亲本细胞PI/AI的9.59下降至3.59及3.24。COLO 320DM结肠癌亲本细胞及各克隆细胞细胞内Adriamycin累积浓度细胞内Adriamycin累积浓度测定显示：各克隆细胞与对照COLO 320DM结肠癌亲本细胞的细胞内Adriamycin累积浓度无显著差异，但用Adriamycin处理后，对照COLO 320DM结肠癌亲本细胞的荧光强度(即细胞内Adriamycin累积浓度)为27.92，而稳定表达＃4029 MDR1 siRNA的克隆细胞及稳定表达＃4123 MDR1siRNA的克隆细胞的细胞内Adriamycin累积浓度均较对照COLO 320DM结肠癌亲本细胞显著增加，其中稳定表达＃4029 MDR1 siRNA的克隆细胞的细胞内Adriamycin累积浓度增加至187.24，增加5.71倍。稳定表达＃4123 MDR1 siRNA的克隆细胞的细胞内Adriamycin累积浓度增加至215.57，增加6.72倍。而阴性对照克隆细胞的细胞内Adriamycin累积浓度均较对照COLO 320DM结肠癌亲本细胞无显著增加。
结论：
1.MDR1 siRNAs抑制结肠癌多药耐药细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达，而且MDR1 siRNA对MDR1 mRNA表达的抑制效应与对P-gp表达的抑制效应之间存在显著的正相关。
2．MDR1 siRNAs对结肠癌多药耐药细胞P-gP表达的抑制呈时间和剂量依赖性。
3．在MDR1/P-gP依赖的结肠癌多药耐药细胞，MDR1 siRNAs对5-Fu、Adriamycin和Vincristine等抗肿瘤药均有增敏作用。
4．MDR1 siRNAs增强抗肿瘤药5-Fu、Adriamycin及Vincristine对结肠癌细胞的细胞动力学的抑制作用。
5．MDR1 siRNAs增加结肠癌细胞细胞内抗肿瘤药的药物浓度，提示MDR1siRNAs能逆转结肠癌细胞MDR1/P-gP依赖的多药耐药性。
本研究选择COLO 320DM结肠癌细胞来探讨siRNA对结肠癌细胞MDR的逆转作用，将HT-29结肠癌细胞作为对照细胞。并选择5-Fu、Adriamycin及Vincristine三种抗肿瘤药来观察RNA干扰效应对结肠癌细胞多药耐药性的影响。
在瞬时转染实验部分，本研究采用两种人工合成的MDR1 siRNAs转染结肠癌细胞，观察MDR1 siRNAs能否抑制结肠癌细胞MDR1 mRNA和P-gP的表达。并进一步观察转染MDR1 siRNAs及联合应用抗肿瘤药后，结肠癌细胞在细胞生长、细胞动力学及细胞内药物累积浓度等方面的变化。
在稳定转染实验部分，用siRNA表达载体转染COLO 320DM结肠癌细胞，采用G418筛选稳定转染的克隆细胞，并采用RT-PCR及Western blot鉴定筛选阳性克隆细胞。从阳性克隆细胞中选择代表性克隆用于基因沉默效应的进一步观察，包括MDR1 mRNA的表达、P-gp的表达、IC<,50>测定、细胞动力学分析及细胞内抗肿瘤药累积浓度的测定等。