【摘 要】
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本论文以灭活溶藻弧菌诱导的红笛鲷仔鱼为研究对象,选择仔鱼母源抗体完全降解,而其自身免疫尚未完全建立这段“特异性免疫应答无能期”,通过抑制消减杂交技术(SSH),构建了诱
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本论文以灭活溶藻弧菌诱导的红笛鲷仔鱼为研究对象,选择仔鱼母源抗体完全降解,而其自身免疫尚未完全建立这段“特异性免疫应答无能期”,通过抑制消减杂交技术(SSH),构建了诱导组和对照组的cDNA差减文库,并对与红笛鲷仔鱼抗菌免疫和免疫系统成熟相关功能基因的表达序列标签(ESTs)进行了分析。本研究以灭活溶藻弧菌(1.0×10~8 cfu/mL)浸泡的红笛鲷仔鱼cDNA为tester,以PBS浸泡的红笛鲷仔鱼cDNA为driver,利用抑制性差减杂交技术构建cDNA差减文库。经检测文库容量为2×10~6个克隆,蓝白斑检验表明重组率为90%,PCR检测表明目的片段大多分布在0.3~1.0 kb之间,符合建库要求。通过对1000个随机筛选的克隆进行测序,共获得ESTs 910个。BLASTx同源性分析表明:720个ESTs序列与NCBI非冗余蛋白质数据库中的蛋白质序列存在显著的相似性,140个ESTs序列与NCBI非冗余蛋白质数据库中的蛋白质序列存在一定相似性,50个ESTs序列与数据库中的蛋白质序列没有相似性。将BLASTx同源性分析结果进行GO分类可将获得的ESTs分为以下8类:免疫防御应激类(7个ESTs,占1%)、细胞骨架类(34个ESTs,占4%)、核糖体类(258个ESTs,占29%)、细胞代谢/呼吸链类(430个ESTs,占51%)、细胞信号转导/粘附类(43个ESTs,占5%)、细胞周期/DNA复制/蛋白调控/转录/翻译类(25个ESTs,占3%)、转运类(17个ESTs,占2%)、其他类(43个ESTs,占5%)。本论文的研究结果为探讨红笛鲷仔鱼免疫防御相关功能基因的作用机理和调控机制奠定了坚实的基础,丰富和发展了仔鱼分子免疫学的研究内容,对于全面了解和认识红笛鲷仔鱼免疫防御的分子机制,具有重要的理论指导意义。
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