论文部分内容阅读
目的:在体外扩增培养的过程中，探讨不同浓度的葛根素对人骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell)生物学特征的改变及成骨分化调控作用机制，从而为将来间质干细胞和葛根素临床应用提供一些理论依据。 方法:(1)分离培养骨髓间质干细胞，采用全骨髓直接贴壁法。借助于形态特征、表面抗原标记等对其进行生物学特性鉴定。(2)运用MTT法检测葛根素对骨髓间质干细胞增殖能力和生长曲线的影响。采用衰老相关β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal)，检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞衰老的影响，碱性磷酸酶染色检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞成骨分化，油红O细胞化学染色检测其成脂分化能力，流式细胞仪分析检测其细胞凋亡情况，采用transwell迁移实验检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞迁移能力的差异，RT-PCR技术检测ALP基因水平表达的差异，采用Western blot检测不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞ERK蛋白表达的影响(3)采用GraphPad Prism5.0软件进行数据统计分析，当p＜0.05时，认为差异有统计学意义。 结果:(1)从骨髓组织中分离出一种长梭形细胞，经纯化后流式细胞仪鉴定符合间质干细胞相应表面标志:CD29(+)，CD44(+)，CD90(+)，CD105(+)，CD34(-)及HLA-DR(-)。(2)不同浓度葛根素对骨髓间质干细胞形态的改变，DAPI染核显示，在对照组细胞核中DNA呈均一分布，而实验组细胞核则呈现比较明显的DNA点块状聚集。(3)MTT检测结果显示，增殖能力随着葛根素浓度增加而下降。流式细胞凋亡显示，随着葛根素浓度增加，凋亡细胞的数量也在增加，此外，transwell迁移实验显示，随着葛根素浓度增加，细胞的迁移能力下降。(4)分化能力:成骨诱导14天，碱性磷酸酶染色显示，与对照组相比，实验组细胞诱导分化能力均随葛根素浓度的增加而增加。(5)基因表达:RT-PCR显示，与对照组细胞相比，实验组ALP mRNA表达量表达上调。(6)western blot:细胞蛋白p-ERK和ERK表达随葛根素浓度的增加而增加。 结论:葛根素对骨髓间质干细胞活性能够产生影响。在一定范围内，葛根素通过ERK信号通路对其成骨分化有促进作用。