蛋白质芯片点样仪工作参数及可视化检测方法的研究

• 作 者: 赵熙睿
• 机 构: 南京大学
• 出 处: 南京大学
• 发表日期: 2011年期
• 关键词: 微孔板蛋白质微阵列 可视化检测 蛋白质芯片点样仪 工作参数

基因组学、蛋白质组学的飞速发展对大规模、高通量生物分析技术的需求越来越强烈。蛋白质芯片技术因其具有灵敏度高、分析通量大等优点已引起了越来越多的生物学家的重视。蛋白质芯片的点样方式主要有接触式与非接触式两种，两种点样方式均需要通过专门的点样仪器精密控制。蛋白质芯片点样仪的研制需要生物学、化学、微电子加工、机器人制造及自动化技术、传感器技术等众多技术的交叉结合，是当代先进生物仪器制造的代表性产品之一。　　微孔板蛋白质芯片是蛋白质微阵列芯片中的一种，特别适合于多靶标的高通量样品的筛选分析。自Mendoza等人建立微孔板蛋白芯片分析方法以来，微孔板蛋白芯片以其能有效地避免实验过程中样品的交叉污染、便于操作等优点迅速发展，微孔板蛋白芯片结合了蛋白质芯片与ELISA方法的优点，在蛋白质组学研究、临床诊断、新药研发以及食品卫生检测中具有广泛的应用前景。目前国内能用于微孔板蛋白质芯片制备的专用点样设备与检测装置很少。本文开展了对接触式微孔板蛋白质芯片点样仪研制中工作参数的研究及可视化检测方法的研究。　　本论文研究工作中首先与清华大学合作进行了接触式蛋白芯片点样仪性能参数的考察。在点样仪工作条件的优化实验中，选择不同的相对湿度、取样液面高度、点样针后坐量、加速度、点样接触时间及片基材料进行了实际点样性能分析，采用CCD检测点样的信号值，考察各种条件对点样效果的影响，确定了最佳点样条件，从而完成了研制的接触式蛋白芯片点样仪的参数确定。　　基于微孔板蛋白芯片可视化检测方法及夹心式ELISA原理，本论文将抗体固定于微孔板底部，逐次加入IgE、适配体修饰的纳米银，形成一个夹心复合物，利用纳米银催化银离子还原，建立了金属银显色检测法，实现了IgE的可视化测定。此外，通过在微孔板同一孔内固定不同浓度的SA作为检测IgE时的内标曲线，根据此内标曲线可实现对未知样品中IgE含量的定量测定，消除血清样品中复杂的背景影响。本实验为IgE的临床检测提供了一种快速、灵敏、经济的检测方法。