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本试验根据GenBank上发表的猪IL-10(interleukin-10，IL-10)基因序列(登陆号：L20001)设计并合成了特异性引物，经ConA(刀豆蛋白素A)诱导的荣昌猪、内江猪外周血单核淋巴细胞(PMBC)，并提取的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出两条为771bp的目的片段，并将其克隆到PMD18-T载体上，经酶切鉴定和序列测定证明该两条序列分别为荣昌猪、内江猪IL-10。开放阅读框由528个核苷酸组成，推测产生的编码产物由175个氨基酸组成。核酸序列分析比对发现，荣昌猪IL-10与内江猪IL-10之间的核苷酸同源性为99.2％，两个地方品种猪的IL-10与GenBank已发表的IL-10序列的同源性较高，都为99.6％，荣昌猪与内江猪间IL-10氨基酸的同源性为98.7％。设计一对引物亚克隆荣昌猪IL-10成熟蛋白编码基因(477bp)，利用基因重组技术构建了PET32a(+)—PIL-10融合表达载体。酶切鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞，用1mM的IPTG进行诱导表达重组荣昌猪IL-10蛋白。SDS-PAGE分析表明，在相对分子质量约为38kD(融合蛋白)处有明显的蛋白质表达条带，而未经诱导的PET-32a(+)-IL10在38 kD处无条带产生，光密度扫描结果显示，诱导四小时后，表达蛋白条带约占菌体总蛋白的48.5％。免疫印迹试验证实重组蛋白可以被组氨酸特异性单抗所识别，表明重组蛋白以带有组氨酸标签的融合蛋白形式表达。最后洗涤表达的IL—10融合蛋白包涵体并用MTT法检测其生物学活性。通过t检验分析表明所获得的重组猪IL-10具有较高的促猪外周血淋巴母细胞增殖反应活性，具有较强的生物学活性。本试验首次克隆出地方猪种—荣昌猪、内江猪IL-10基因，并通过对基因序列改造后经原核表达出荣昌猪IL-10融合蛋白，这为进一步研究地方猪种IL-10在体内外的作用，并为研究其生理活性及在疾病和疫苗免疫中的作用提供了条件，同时对地方猪种IL-10的深入研究，可以为地方猪种作为免疫移植的供体提供参考。