哮喘患儿外周血CD4<'+>CD25<'+>调节性T细胞的变化及其临床意义

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研究背景: 支气管哮喘(简称哮喘)是以多种炎性细胞(如肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞)及多种炎症因子参与的气道慢性炎症和气道高反应性为特征的疾病。近十余年来,美国、英国、澳大利亚、新西兰等国家哮喘患病率和死亡率有上升趋势,全世界约有一亿哮喘患者,已成为严重威胁公众健康的一种慢性疾病,我国儿童哮喘患病率亦呈上升趋势。 迄今为止,支气管哮喘的发病机制尚未完全清楚,从上世纪80年代开始,辅助性T细胞(helper T lymphocyte,Th)1/Th2平衡理论逐渐占据了主导地位,但此理论并不能解释哮喘的全部临床表现及治疗反应,近期研究提示支气管哮喘的免疫学发病机制远较Thl/Th2失衡复杂,其它免疫调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)可能参与了支气管哮喘的发病。 Tr是一类调节或抑制其他免疫细胞功能的细胞,在多种免疫性疾病中发挥重要作用。根据Tr细胞的起源,抗原特异性及效应机制的不同,可分为自然调节性Tr和获得性Tr,自然Tr主要是指自然产生的CD4+CD25+Tr,获得性Tr细胞主要包括Tr1细胞和Th3细胞。 CD4+CD25+Tr是1995年由Sakaguchi等首次发现的具有免疫调节作用的专职抑制细胞,具有免疫无能性和免疫抑制性两大特征。自然产生的CD4+CD25+Tr来源于胸腺,占正常人及小鼠外周CD4+T细胞的5%~10%。 CD4+CD25+T,的作用机制现在还不十分清楚,其可能机制有:通过细胞与细胞接触发挥抑制作用(通过表达某种或某些表面分子如Foxp3,GITR,CTLT-4等),或者通过分泌细胞因子(如TGF-β,IL-10)而介导的抑制作用,一般认为以前者更为重要。有研究显示CD4+CD25+T,与支气管哮喘的发病、治疗及预后有着重要的关系,但对其具体机制仍不十分清楚。哮喘发生率不断增长的原因尚不清楚,但值得注意的是世界范围内超重和肥胖的发生率同时也在增长。流行病学、动物实验等证据均支持两者之间的关联性,深入探讨肥胖在哮喘发生和发展中的作用,有助于哮喘病因与发病机制的研究,将对哮喘的防治提供新的研究方向。 研究目的: 1、通过观察分析不同分级、分期、有无过敏史、有无正规治疗及不同治疗效果的哮喘患儿外周血CD4+CD25+Tr比例变化,探讨CD4+CD25+Tr与哮喘发病、治疗、预后的关系。 2、通过观察不同体重指数(BMI)哮喘患儿外周血CD4+CD25+T,比例变化,初步探讨肥胖者哮喘与CD4+CD25+Tr的关系。 研究对象与方法: 1、研究对象 支气管哮喘组患儿为70例,其中急性发作期哮喘患儿为60例,缓解期哮喘患儿为10例。急性发作期哮喘患儿按病情严重程度的分为轻度、中度两组,轻度组患儿为34例,中度组患儿为26例;根据有无过敏史,将哮喘患儿分成有过敏史组和无过敏史组,有过敏史组患儿为40例,无过敏史组患儿为30例;根据有无正规治疗分为规则治疗组和不规则治疗组,规则治疗组患儿为26例,不规则治疗组患儿为44例;规则治疗后的哮喘患儿根据治疗效果分为完全控制组、部分控制组和控制不佳组,完全控制组患儿为10例,部分控制组患儿为11例,控制不佳组患儿为5例;根据BMI将哮喘患儿分成正常体重组和超重组,正常体重组患儿为56例,超重组患儿为14例。对照组为50例。 2、研究方法 2.1外周血CD4+CD25+Tr比例的测定:抽取外周血2~3m1,EDTA抗凝后送流式细胞仪室,梯度离心分离淋巴细胞,加入FITC标记CD4和PE标记的CD25单抗,用BectionDikison FACS Calibur流式细胞仪测定CD4+CD25+Tr占CD4+T细胞比例。 2.2外周血免疫球蛋白E(IgE)测定:抽取外周血1~2ml后,离心分离出血清,通过酶联免疫法(ELASA)检测血清中IgE含量,IgE浓度单位是IU/ml。 2.3观察指标与随访:患儿就诊时分期、分度、病程、身高、体重、过敏史、治疗措施及效果。 3、统计学方法 符合正态分布连续性计量资料用均数±标准差(X±s)表示,两组均数比较采用独立样本t检验,多组均数比较采用方差分析,采用LSD-t检验进行组间比较;双变量相关分析采取变量间pearson相关分析,多变量等级相关分析采用spearman等级相关分析;P<0.05有统计学差异。所有数据统计分析均使用SPSS13.0软件包进行分析。 结果: 1、急性发作期组患儿外周血CD4+CD25+Tr水平(6.17±1.72)%较缓解期组患儿(7.56±1.48)%及对照组儿童(7.13±1.48)%均降低,差异均具有统计学意义,p<0.05。缓解期患儿外周血CD4+CD25+Tr水平(7.56±1.48)%与对照组儿章(7.13±1.48)%差异无统计学意义,p>0.05。 2、轻度组患儿外周血CD4+CD25+Tr水平(6.62±1.58)%高于中度组患儿(5.46±1.73)%,差异具有统计学意义,p<0.05。将哮喘缓解期组患儿定为一级,轻度组患儿定为二级,中度组患儿定为三级,进行spearman等级相关分析,结果显示呈负相关,相关系数为-0.361,p
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