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目的：鉴定恒河猴MyD88基因沉默siRNA的重组腺病毒载体在恒河猴未成熟树突状细胞(immature dendritic cell, imDC)中的表达情况及探讨恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体感染恒河猴imDC对T细胞免疫应答的影响。方法：在静脉麻醉的情况下,抽取恒河猴骨髓血,使用猴淋巴细胞分离液将采取的骨髓血中的单个核细胞分离出来,利用免疫磁珠试剂盒和磁极正性分选CD34+阳性细胞,并对其进行纯化。在得到的细胞中添加培养基及细胞因子GM-CSF、IL-4进行培养。将上述CD34+阳性细胞培养并诱导至第7天,细胞计数后以每孔2.5×105个细胞接种于24孔板中,按MOI为100、200、300、400、500、600分别加入病毒,48小时后观察细胞绿色荧光色素蛋白的表达情况。将第一部分得到的CD34+阳性细胞培养并诱导至第7天,按MOI为500～600用重组腺病毒感染48小时提取蛋白,然后通过Western Blot检测技术检测蛋白表达情况。混合淋巴细胞反应,按照不同的方法处理刺激细胞将刺激细胞分为：DC组、imDC组、基因沉默imDC组、LPS+imDC组、LPS+基因沉默imDC组。以T细胞作为反应细胞,流式细胞术检测T细胞。根据刺激细胞：反应细胞比例为1：5,1：10,1：20,1：40加入反应细胞。通过统计学分析各组对T细胞的增殖情况。结果：利用免疫磁珠法获得的DC纯度较高,使用细胞因子培养第四天后可诱导imDC成熟。重组腺病毒载体在恒河猴未成熟树突状细胞中的稳定感染的MOI为500-600。 Western Blot检测可见33kD处出现特异性条带,在43kD处可见β-actin内参成功表达,可推断目的蛋白在imDC中成功表达,且重组腺病毒载体在imDC中的蛋白表达明显低于空白组及阴性对照组。通过分析MyD88干扰组蛋白表达较空白对照组表达水平下调73.5%,MyD88干扰组蛋白表达较阴性对照组表达水平下调80.6%。尼龙毛柱法分离出的T细胞纯度大于80%,有实验意义,可作为反应细胞进行实验。混合淋巴细胞培养,由统计结果得出结论：imDC组刺激T细胞增殖的能力显著低于mDC组；重组腺病毒感染的imDC组刺激T细胞增殖的能力显著低于其他组。结论：免疫磁珠法可纯化DC,细胞因子可诱导DC向imDC分化;当MOI为500～600时,重组腺病毒载体在恒河猴imDC中可获得最佳感染效率；恒河猴MyD88基因沉默siRNA在恒河猴imDC中的蛋白表达受到明显抑制；重组腺病毒感染的imDC可抑制T细胞的增殖。展望：利用重组腺病毒感染未成熟树突状细胞,在进行体内实验时通过门静脉将感染后的imDC注入受体体内,希望可以诱导免疫耐受的产生,为移植领域开辟新道路。