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B群链球菌(Group B streptococcus，GBS)是新生儿细菌性肺炎、脑膜炎和败血症的主要致病菌，也是围产期妇女细菌性感染的主要病原体，近年来，在免疫力低下的成人中也呈上升趋势。荚膜多糖(Capsular polysaccharide，CPS)抗原与蛋白质载体共价结合形成的结合疫苗是预防GBS感染性疾病的经济有效措施。 这种疫苗的研制需要大量纯化的荚膜多糖抗原，本试验选用分布广、毒力强的血清ⅢGBS32325作为疫苗制备用的生产菌株。通过摇瓶试验比较不同液体培养基、生长因子和培养方法对GBS生长的影响，优化了培养条件，并逐级放大到10L和100L的发酵罐中进行深层液体培养，经过多次试验，确立了GBS生长和荚膜多糖合成的规律以及荚膜多糖抗原的收获时间。GBS培养5-6小时，发酵液中的菌浓度达到24亿／mL，荚膜多糖含量达到562ug／mL，为菌体抗原收获的最佳时间。 建立起荚膜多糖抗原分离纯化的工艺条件，用55％、75％乙醇从GBSⅢ发酵液中的分级沉淀荚膜多糖，并经过25％的乙醇沉淀去除核酸，冷的苯酚抽提去除杂蛋白，获得纯化荚膜多糖抗原。其得率为0.021g／L，0.042g／L；分配系数为0.52，0.68；残留的蛋白质含量和核酸含量均低于1％。 以溴化氰(CNBr)作氧化剂，己二酰肼(ADH)为间桥，碳二亚胺(EDAC)为偶联试剂，将2种纯化的荚膜多糖抗原分别与蛋白质载体(精制破伤风类毒素)共价偶联制备成结合疫苗，2种结合物中分配系数≤0.08的结合物收率为20％和70％。用获得的结合物及纯化的ⅢCPS经过皮下注射免疫小鼠，间接ELISA法检测小鼠血清内抗ⅢCPS的IgG抗体滴度，结果显示ⅢCPS—TT结合物诱导产生的免疫反应远比单独的荚膜多糖强烈。证明破伤风类毒素作为蛋白质载体能有效增强荚膜多糖抗原的免疫原性；制备的ⅢCPS—TT结合疫苗可用于人类GBS感染性疾病的预防。