eIF4E在急性髓细胞白血病中的表达研究

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目的:1、通过RT-PCR法检测急性髓细胞白血病(AML)与非肿瘤对照者骨髓标本eIF4E的表达情况,比较eIF4E在AML与非肿瘤对照组之间的表达差异。2、检测AML诱导治疗前后eIF4E表达情况,观察诱导治疗前后eIF4E表达差异。3、计算M4、M5型AML与其他亚型AML eIF4E表达情况,进一步比较不同亚型AML之间eIF4E表达的差异。4、统计AML基因突变的表达情况,分析eIF4E表达与AML其他分子生物学异常的相互关系。方法:1、标本采集:采集初诊AML、诱导治疗达完全缓解AML及非肿瘤对照者骨髓标本,提取单个核细胞,加入TRIzol试剂充分裂解细胞,-80℃冷冻保存。AML诊断及疗效标准符合张之南《血液病诊断及疗效标准》。非肿瘤对照者纳入疾病包括免疫性血小板减少症、良性疾病导致的缺铁性贫血。2、实验分组:将初诊AML设为实验组,非肿瘤对照者设为对照组。将实验组能够耐受并同意化疗者进行常规诱导化疗,其中,非M3型AML化疗方案为DA(柔红霉素45-60mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d)或IDA(去甲氧柔红霉素8-12mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d)标准诱导方案;M3型AML化疗方案为维甲酸+三氧化二砷(维甲酸20mg/m2/d口服至完全缓解、三氧化二砷0.16mg/kg/d静脉注射至完全缓解)双诱导方案,并根据个体情况加用蒽环类药物化疗。3、检测方法:根据人eIF4E基因mRNA序列设计引物(NM001130679),eIF4E上游引物:5’-ACGGAATCTA ATCAGGAGGT-3’,下游引物:5’-TTCCCACATAGG CTCAATAC-3’,扩增片段长度为246bp。根据人β-actin基因mRNA序列设计引物(BC002409),β-actin上游引物:5’-CTGGGACGACATGGAGAAA A-3’,下游引物:5’-AAGGAAGGCTGGAAGAGTGC-3’,扩增片段长度为564bp。使用淋巴细胞分离液提取单个核细胞,使用TRIzol试剂等抽提RNA,并用AMV逆转录试剂盒进行逆转录,在聚合酶链式反应体系中分别加入β-actin、eIF4E引物进行聚合酶链式反应,使用琼脂糖凝胶电泳鉴定β-actin、eIF4E的表达。4、统计分析:根据所得实验数据进行统计分析,定量资料两组间比较采用t检验,定性资料两组间比较采用卡方检验,定性资料关联性分析采用卡方检验。结果:1、本实验通过RT-PCR法检测AML骨髓标本eIF4E表达情况,测得55例初诊AML中36例eIF4E阳性表达,eIF4E阳性率为65.5%,经诱导治疗达完全缓解后3例AML骨髓细胞eIF4E由阳性转为阴性,非肿瘤对照者eIF4E全部阴性。2、18例M4、M5型AML中15例eIF4E阳性表达,eIF4E阳性率为83.3%,37例其他亚型AML中21例eIF4E阳性表达,eIF4E阳性率为56.8%,统计学分析提示M4、M5型AML与其他亚型AMLeIF4E表达无差异(P>0.05)。3、55例初诊AML中,4例FLT3/ITD基因突变阳性表达,统计学分析提示eIF4E表达与FLT3/ITD基因突变表达无相关性(P>0.05)。结论:1、部分初诊AML eIF4E高表达,诱导治疗达完全缓解后少部分AML骨髓细胞eIF4E表达水平下降。eIF4E表达水平有可能作为AML控制情况的一个检测指标。2、M4、M5型AML与其他亚型AML eIF4E表达无差异。3、eIF4E表达与FLT3/ITD等分子指标表达相互独立,无相关性。
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