苦参碱的分离纯化及其初步药效学实验研究

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苦参(Radix Sophorae flavescentis)别名野槐,属于豆科(Leguminosae)。除我国海南、新疆、青海以外,其余各省区均有分布。苦参作为一味传统中药材,一直受到人们的广泛关注。目前,国内外许多学者对苦参的化学成分、药理作用以及临床应用均进行了较为详细的研究,从中分离出生物碱类、黄酮类化合物等多种成分,并获得许多有效成分以及对其功能主治的认识。据大量文献报道,其中苦参碱及氧化苦参碱是苦参中提取的重要成分,具有杀虫抑菌,抗炎及免疫抑制,抗心率不齐,抗肿瘤等多种活性。心脑血管疾病是现代社会严重危害人类身心健康和安全的多发病和常见病,在传统的支架植入术后20—30%的病人出现了血管再狭窄。因此,本课题希望从中药苦参中分离提取出具有抗血管内膜增生的单体物,并对其进行初步的药效学实验研究。首先,采用了超声波技术提取苦参碱,通过实验发现料液比、苦参浸泡时间、提取剂体积分数、超声时间都能影响苦参碱的提取量,并且其影响都是明显的。影响的主次顺序为:料液比(苦参质量与乙醇体积比)>苦参浸泡时间>乙醇体积分数>超声时间。在单因素实验的基础上,采用正交实验优化苦参碱提取的最适宜提取方案是料液比1:10,乙醇体积分数90%,苦参浸泡时间3h,超声时间20min。接着,在纯化实验中,采用了AB-8大孔吸附树脂对苦参碱进行了分离纯化。苦参碱初提物湿法上柱后用80%乙醇溶液洗脱,收集醇洗脱液,浓缩萃取,干燥,得到纯度为47.26%的苦参碱。为了了解苦参碱的理化性质,研究了pH、温度、氧化剂、还原剂、NaCl对其稳定性的影响。苦参碱在酸性条件下是比较稳定的,而在碱性条件下是较不稳定的。温度≤60℃时,苦参碱是较稳定的;温度≥80℃时,苦参碱有一定的降解作用。因此,苦参碱在保存和使用中应避免高温和长时间加热。苦参碱的抗氧化剂能力低,在保存和使用中,应该注意防止氧化。但还原剂Na2SO3对苦参碱的影响不明显。NaCl对苦参碱溶液的吸光度值影响也不明显。还针对苦参碱对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抑菌作用进行了实验研究。发现苦参碱是很有前途的抑菌剂,抑菌效果明显,但其抑菌机理有待于进一步研究。本试验为天然食品防腐剂的开发和中药苦参的综合利用开辟了一条奚径。最后,在药理药效活性研究中,探讨了苦参碱对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)的影响。首先建立了H2O2诱导氧化损伤模型。再用25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的苦参碱处理氧化损伤的细胞,发现细胞存活率由H2O2损伤组的20.60%分别上升至38.20%、58.87%、72.30%和40.10%。与对照组相比苦参碱在50μg/ml、75μg/ml这2个浓度表现出了对内皮细胞明显的保护作用,细胞存活率较高。该结果显示,苦参碱具有开发成为治疗血管再狭窄药品的潜力和可能。
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