论文部分内容阅读
目的:麦角甾酮是多种药用真菌的主要组成成分,具有利尿、治疗慢性肾脏病、抗肿瘤等多种活性,但麦角甾酮在真菌中含量低,限制了它的开发与应用。所以本课题通过化学合成法合成麦角甾酮,简化合成步骤,优化合成工艺,解决其资源问题,并进一步探讨麦角甾酮对肺损伤、胃溃疡、肝损伤的保护作用及抗炎机制,为麦角甾酮及真菌类中药的开发与应用提供理论依据。方法:以麦角甾醇为底物,加入单一氧化还原剂合成麦角甾酮,分离纯化后,以薄层色谱、高效液相色谱-紫外检测及核磁共振技术确定合成化合物为麦角甾酮,再通过考察氧化还原剂、溶剂、温度、时间等条件,以高效液相色谱为检测手段,确定最优合成工艺。经柱色谱分离的麦角甾酮,通过建立脂多糖诱导急性肺损伤小鼠模型、酒精诱导急性胃溃疡小鼠模型和酒精诱导急性肝损伤小鼠模型研究其对肺损伤、胃溃疡、肝损伤的保护作用及对NLRP3炎性体信号通路的影响,并运用16S rRNA基因测序技术研究其对酒精诱导的急性肝损伤小鼠肠道菌群的影响。结果:麦角甾酮的最佳合成工艺:取摩尔比为1:2的麦角甾醇100 mg和DDQ 114.5mg,置于50 mL圆底烧瓶中,加入20 mL二氯甲烷,60℃加热回流15 min,采用高效液相色谱法确定麦角甾酮的合成率约为64%;脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的实验表明,麦角甾酮能显著下调W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、P-selectin、ICAM-1、MDA、MPO和NO的水平,上调SOD的水平,并显著抑制NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β和IL-1β蛋白的表达;酒精诱导小鼠急性胃溃疡的实验表明,麦角甾酮能显著下调TNF-α、MTL、SP、MPO、MDA、AST和ALP的水平,上调VIP和SOD的水平,并显著抑制NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β和IL-1β蛋白的表达;酒精诱导小鼠急性肝损伤的实验表明,麦角甾酮能显著下调AST、ALT、γ-GT、TNF-α,IL-1β、IL-18和MDA的水平,上调PA和SOD的水平,显著抑制NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β和IL-1β蛋白的表达,并调节了酒精引起的肠道菌群变化。结论:确定了麦角甾酮的最佳合成工艺,并建立了高效液相色谱检测该工艺中麦角甾酮含量的方法;麦角甾酮可以通过抑制NLRP3炎性体信号通路的活化,对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤、酒精诱导的小鼠急性胃溃疡和酒精诱导小鼠急性肝损伤均具有较好的保护作用,并且还可以调节酒精诱导的急性肝损伤小鼠的肠道菌群变化。