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我国社会已呈现老龄化,独生子女家庭工作压力等客观因素的突出,饲养宠物成为众多家庭的消遣方式。近年来,宠物产业逐渐发展起来,尤其是宠物犬的数量明显高于其他宠物。随着市场对优秀种犬的需求增加,犬的人工辅助繁殖技术越来越受到关注,其中犬精液保存技术与人工输精技术对推动宠物犬产业发展具有十分重要的作用。为了充分利用优秀种犬的利用率,满足社会对宠物犬的需求,利用理想的精液稀释液进行低温保存,最终采用人工输精批量获得优秀宠物犬的后代是目前急需解决的问题。目前常用的稀释液中绝大多数都是添加卵黄作为保护剂。然而,很多研究报道卵黄具有携带病原微生物的风险,其成分复杂,甚至某些成分会与精子中的酶作用产生过氧化物,因此,采用其他物质代替卵黄作为保护剂是非常有必要的。本研究在犬精液稀释液中添加不同浓度的大豆卵磷脂进行低温保存,通过精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工输精后受胎率分析保存效果。同时,检测母犬整个发情期的血清孕酮水平,总结发情期孕酮变化规律,并再进行犬人工输精试验,评估不同浓度血清孕酮值时的人工输精后的受胎率。优化了犬精液低温保存剂,改进了犬人工输精技术,为推广犬辅助生殖技术奠定了基础。本研究主要获得以下结果:1.采用不同浓度(0.5%、1.0%、2.0%)的大豆卵磷脂作为保护剂,对法国斗牛犬精液进行低温4℃冷藏168 h,结果发现1.0%大豆卵磷脂组精子活率、活力、质膜完整率和顶体完整率均显著高于其他两个试验组和20%卵黄对照组,表明精液稀释液中添加1.0%大豆卵磷脂可以替代卵黄作为犬的精液低温冷藏保护剂。2.通过酶联荧光测定法对57只自然发情的法国斗牛母犬进行了血清孕酮值检测,结果发现从发情第0 d到第5 d孕酮水平呈缓慢增长趋势,在第5 d血清孕酮值为3.31±0.90 ng/m L,随后迅速上升;在第6 d孕酮值达到6.58±1.44 ng/m L,在发情第12d,血清孕酮水平为23.89±2.93 ng/m L,因此,发情期犬血清孕酮水平一直上升。3.在法国斗牛犬发情期不同血清孕酮值范围进行人工输精,结果发现血清孕酮值为20.01～25.00 ng/m L时人工输精,受孕率为63.1%,平均窝产仔数5.5只;血清孕酮值为15.01～20.00 ng/m L时人工输精,受孕率为47.3%,平均窝产仔数4.7只;血清孕酮值为10.00～15.00 ng/m L时人工输精,受孕率为36.8%,平均窝产仔数3.7只。结果表明血清孕酮值浓度为20.01～25.00 ng/m L时人工输精效果最佳。4.分别用含1.0%大豆卵磷脂和20.0%卵黄的稀释液冷藏精子,48 h后,对自然发情的血清孕酮值为20.01～25.00 ng/m L范围内的法国斗牛犬进行人工输精,共输精48只犬,结果发现1.0%大豆卵磷脂组母犬妊娠率为70.8%(17/24),产仔总数为98只;20.0%卵黄组母犬妊娠率为62.5%(15/24),产仔总数为80只,说明使用1.0%的大豆卵磷脂稀释液比20%卵黄稀释液低温保存犬的精子,用于人工输精效果更佳。因此,对于法国斗牛犬精液低温4℃保存,使用1.0%大豆卵磷脂作为保护剂代替20%卵黄是可行的;在人工输精时,当血清孕酮水平处于20.01～25.00 ng/m L时,人工输精效果显著好于其他血清孕酮值时的输精效果。