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p53蛋白是肿瘤抑制因子，具有保护生物基因组免遭损伤DNA的功能。研究表明，鱼类的p53蛋白参与DNA损伤修复、细胞凋亡、细胞周期控制、胚胎发育等重要生命活动。虽然在人体中p53对于机体的正常生命活动发挥着重要的作用，但是，在鱼类中的功能研究却很少。因此，本研究设计兼并引物获得了斜带石斑鱼p53(Ec-p53)全长cDNA序列，表达和纯化了斜带石斑鱼pET-32a.p53融合蛋白。存此基础上，我们又进一步的检测了pH和温度变化对p53表达谱系的影响。本文主要研究结果如下： 1.利用设计兼并引物和RACE-PCR方法获得的Ec-p53cDNA全长为1921bp(GenBankAccessionNo.HM622380)，其中5’端非编码区长102bp，开放阅读框长1143bp，3’端非编码区长676bp。p53开放阅读框编码了381个氨基酸，分子量为42.3kDa。对斜带石斑鱼与其他脊椎动物1053氨基酸序列的同源性比较和进化树分析结果显示，Ec-p53与牙鲆的同源性最高(83％)。 2.应用半定量RT-PCR技术，检测了Ec-p53在石斑鱼组织中的分布情况。结果显示Ec-p53在检测的斜带石斑鱼组织中均有表达，其中，在肝脏和肠中的表达量最高。 3.选用了表达效率较高的pET-32a原核表达系统，构建了融合表达载体pET-32a-p53，并转化至大肠杆菌BL21，在IPTG诱导下成功表达重组蛋白reEc-p53。Westrenblot结果证实，所表达的reEc-p53为斜带石斑鱼重组p53。 4.reEc-p53主要以包涵体的形式存在菌体内，在经过溶解和纯化后，获得大小为72.4kDa的纯化蛋白；以纯化reEc-p53蛋白为抗原，皮下注射免疫雄性新西兰兔，制备得到p53蛋白的特异性多克隆抗血清，经Westernblot检测其特异性，能特异识别结合斜带石斑鱼组织总蛋白中的p53蛋白。 5.用实时荧光定量PCR和Westernblotting分别检测了不同环境应激(pH，温度应激)下Ec-p53基因的mRNA和蛋白表达谱系。在pH应激中，Ec-p53基因的mRNA水平在经酸应激后的12h在肝脏中达到了最高峰，与空白组(Oh)相比较上升了9倍，随后Ec-p53转录水平开始下降。Westernblotting检测显示，Ec-p53蛋白酸性应激后的12h表达量最高。在碱应激中，12h后Ec-p53的mRNA和蛋白的表达量均达到了最高值。石斑鱼经过低温应激(15±0.5℃)以后Ec-p53mRNA的表达水平则是处理后的3h开始上升，6h达到了最高峰，Ec-p53蛋白的表达量则是在应激后的24h上升到最高。 结论：本文首先利用兼并引物和RACE技术克隆出了Ec-p53的全长cDNA，并对推导出的氨基酸序列于其他脊椎动物的。p53进行了同源比较和进化树分析。采用半定量RT-PCR技术研究了p53基因在斜带石斑鱼组织中的分布表达情况。实时荧光定量PCR和Westernblotting的检测结果显示Ec-p53在环境应激(pH，温度应激)后，mRNA和蛋白的表达量均高于对照组。综合以上实验结果，我们可以推测Ec-p53基因在石斑鱼的抗逆境机制中起到了重要的作用。为Ec-p53基因在石斑鱼养殖产业中的应用奠定了基础。