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目的:邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(Di-(2-ethylhexyl)Phthalate，DEHP)，是使用最广泛的增塑剂，常用于玩具、医疗器械、建材、食品包装等。DEHP结构松散易于浸出，人类接触途径广泛。目前已有的研究结果表明，DEHP暴露会影响机体营养代谢状态。相关学者发现邻苯二甲酸盐与胰岛素抵抗相关，且证实DEHP通过氧化应激引起胰岛素抵抗。酒精会损害消化、神经、内分泌、循环系统，其毒性与氧化应激相关。吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone，PQQ)，可通过活性氧清除与线粒体相关的细胞信号途径有效发挥有抗氧化作用。本研究选取大鼠胰岛细胞(Ins-1)作为研究对象，探讨DEHP对Ins-1细胞的毒性作用，并探究与此毒性相关的分子机制。同时探究酒精和PQQ对此毒性的影响。 方法:本试验选取Ins-1细胞作为研究对象。采用MTT法评估各个浓度DEHP对大鼠胰岛细胞Ins-1活性的影响;选用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)观察、检测DEHP对Ins-1细胞DNA的损伤程度;用RT-PCR试验方法检测与DNA损伤相关的两个基因p53、ATM基因的表达水平。为探讨DNA损伤相关的潜在机制，选用罗丹明123(rhodamine123)、苯二醛(OPT)、2，7-二氯二氢荧光素荧光染料(DCFH-DA)、3,6-双(二甲基氨基)吖啶氯化锌盐酸盐(吖啶橙，AO)作为探针，并选荧光分光光度计分别测定DEHP对Ins-1细胞的线粒体膜稳定性、细胞内还原性谷胱甘肽(GSH)水平、细胞内活性氧(ROS)以及细胞溶酶体膜稳定性的影响。通过PQQ与DEHP共同作用于Ins-1细胞检测PQQ在DEHP诱导Ins-1细胞氧化性损伤中的作用。同时基于以上试验方法检测DEHP和乙醇联合作用损伤Ins-1细胞的机制。选用SPSS19.0对试验结果进行统计学分析。 结果:DEHP处理Ins-1细胞1h后，观察分析发现DEHP能引起Ins-1细胞出现彗星样拖尾，且拖尾现象随DEHP浓度的增大而愈加明显。与对照组相比，DEHP处理组的尾长、尾部DNA/头部DNA(％)和尾距均明显增大，且差异有显著性。另外，DEHP可引起细胞内还原性谷胱甘肽GSH水平下降，活性氧ROS的量增多，溶酶体和线粒体的膜稳定性均有不同程度下降。和DEHP单独作用相比，PQQ和DEHP共同作用所诱导的Ins-1细胞的DNA链断裂程度减轻、细胞内ROS的量明显降低、细胞内GSH水平有所升高、细胞溶酶体和线粒体的膜稳定性均增加。在DEHP和乙醇的联合作用，Ins-1细胞彗星样拖尾明显加剧、细胞内ROS量明显地增加、细胞内GSH水平有所降低、细胞的溶酶体和线粒体膜稳定性均降低。 结论:氧化应激是DEHP对Ins-1细胞遗传毒性的发生机制。同时，溶酶体-线粒体途径在DEHP诱导Ins-1细胞基因毒性的过程中起着十分重要的作用。PQQ可以通过清除细胞内ROS、减少GSH耗竭两种方式来减轻细胞应激状态，并降低溶酶体、线粒体膜稳定性下降程度，从而对DEHP诱发的Ins-1损伤起到保护作用。乙醇通过加强细胞氧化应激状态(即增加细胞内ROS的量，并降低细胞内GSH的量)，与DEHP联合引起Ins-1细胞损伤加重。同时，乙醇增加溶酶体和线粒体膜的不稳定性，从而进一步加剧Ins-1细胞损伤。