迷迭香叶非精油组分清除自由基、抗氧化及抗人肝细胞HL7702氧化损伤作用的研究

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现代研究表明,许多人类疾病如心脑血管疾病、肿瘤、早老性痴呆、退行性疾病、组织损伤炎症和衰老等,其过程中都有自由基的参与。实验证明,只要在自由基反应中加入少量自由基清除剂或抑制剂,就能减轻或消除自由基的损害。长期以来,人们一直使用合成抗氧化剂,但因其具有较多的毒副作用,所以人们将研究重点转向了低毒高效的天然抗氧化剂,特别是从芳香植物中提取抗氧化剂成为了研究的热点。目前国内外对芳香植物的精油含量及组分研究较多,而对芳香植物的非精油组分的清除自由基、抗氧化作用及对细胞的抗氧化损伤的保护作用研究较少。本研究采用沪产迷迭香的干燥叶片作为实验材料,提取精油后,分别以水、乙醇和乙酸乙酯为溶剂,提取迷迭香叶的非精油组分,然后用超氧阴离子自由基(O2-·)、羟自由基(·OH)、过氧亚硝基(ONOO-)、过氧化氢(H2O2)、碳酸自由基(CO3-·)和·OH氧化损伤DNA的化学发光体系,脂质过氧化和二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)比色体系,检测3种不同溶剂提取物对自由基的清除作用和抗氧化作用,并通过计算IC50比较三者的作用效果。再以人的正常肝细胞株HL7702为实验材料,检测迷迭香叶非精油组分水提取物和乙醇提取物在H2O2胁迫下对HL7702的还原型谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)和过氧亚硝基(ONOO-)浓度的影响,并通过MTT法和流式细胞仪检测迷迭香叶水提取物和乙醇提取物对H202胁迫下的HL7702细胞生长状态和周期的影响。清除自由基和抗氧化实验表明:迷迭香叶非精油组分3种不同溶剂提取物均能有效清除O2-·、·OH、H2O2、CO3-·、ONOO-和DPPH·,减轻自由基对DNA的氧化损伤,抑制脂质过氧化,且作用效果呈剂量依赖关系,即提取物浓度越大,清除自由基和抗氧化的效果越好。其中水提取物抑制自由基对DNA的氧化损伤和脂质过氧化能力较强,其抑制化学发光50%时的样品质量浓度(IC50)分别为32.3和36.11μg/mL;乙醇提取物清除O2-·、ONOO-和CO3-·的效果较佳,IC50分别为189.19、1.67和84.69μg/mL;乙酸乙酯提取物清除·OH、H2O2和DPPH·的效果较好,IC50分别为4.12、1.92和49.55μg/mL。细胞学实验表明:迷迭香叶非精油组分水提取物和乙醇提取物均能在低浓度下对H2O2胁迫下的HL7702产生一定的保护作用并影响其细胞周期,并且可在一定程度上提高受损细胞内GSH的含量,抑制受损细胞内MDA和ONOO-的产生。由此可知,迷迭香叶非精油组分水提取物和乙醇提取物均有提高受损HL7702内抗氧化剂含量和清除自由基的作用,提示迷迭香叶提取物可能具有减轻和预防与自由基相关的肝病的作用。上述实验表明,沪产迷迭香叶非精油组分具有良好的清除自由基、抗氧化及对肝细胞抗氧化损伤的保护作用。这些结果可为沪产迷迭香在食品、保健和医药等领域的进一步开发利用提供实验依据。
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