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肝癌是居全球第3位、居我国第2位的癌症相关死亡因素。具有发病隐匿、潜伏期长、恶性程度高、进展快、侵袭性强、预后差等特点，目前肝癌已成为我国公共卫生难题，严重危害我国国民身体健康。大部分肝癌病例发现时已属中晚期，丧失了根治性手术治疗的机会，因此各种非手术治疗手段如经导管动脉化疗栓塞术发挥着越来越重要的作用，且显示出良好疗效。然而，不同患者的疗效及预后存在较大差异。准确有效的判断患者预后是提高肝癌患者TACE治疗效果、降低病死率的重要手段。目前，传统的临床病理指标，如AFP、肿瘤大小及数目、血管侵犯、门静脉癌栓甚至临床分期、病理分级等，难以准确判断患者预后。因此，结合肝癌患者临床资料筛选新的预后判断标志物对于指导肝癌临床治疗及选择TACE潜在收益的患者均具有重要意义。 端粒长度异常与多种肿瘤的预后密切相关。除传统的临床因素如AFP、肿瘤大小及数目、血管侵犯、门静脉癌栓及病理分级等与肝癌患者的预后相关之外，越来越多的研究关注患者本身遗传易感因素在肝癌预后中的价值。以往大量临床研究表明，端粒长度异常与肿瘤患者预后密切相关；尤其是外周血的平均端粒长度可能作为潜在生物标志物预测多种恶性肿瘤患者的预后。然而关于外周血的平均端粒长度预测肝癌患者预后的研究尚未见报道。 mtDNA含量异常与多种肿瘤的预后密切相关。线粒体是真核细胞中具有双层膜结构的细胞器。细胞所处不同的功能状态，其线粒体数目从几个至几万个不等。线粒体在多种细胞活动中发挥着极其关键的作用，如细胞内能量产生，细胞凋亡，细胞内活性氧产生、Ca2+浓度调节及内质网应激等。已有研究结果证实mtDNA拷贝数异常与恶性肿瘤的发生发展及预后密切相关。然而关于外周血的mtDNA含量与肝癌患者预后的研究尚未见报道。 基于以上分析，本实验利用肝癌患者外周血样本进一步探讨外周血的平均端粒长度及mtDNA含量单独或者联合应用在评估肝癌预后中的意义。 本课题研究包括四部分： 第一部分：肝癌病例的入组及各临床因素与预后关系的研究 按照设定的纳入标准，首先完成肝癌患者的入组工作。同时，采用前期制作的标准化《个人基本情况登记表》、《医疗记录摘要表》及《患者预后随访表》，完成入组病例流行病学资料、临床资料及预后随访资料的收集整理工作。最短随访时间为12个月。每例患者均采集外周血5ml并提取基因组DNA，用于后续的实验。 根据治疗方式，从729例肝癌患者中选择单纯TACE治疗的病例250例。单因素COX回归分析结果显示：肿瘤直径>5cm[2.47(1.67-3.65);P<0.001]、门静脉癌栓[2.30(1.64-3.24);P<0.001]、Child-Pugh分级为B[2.01(1.27-3.21);P=0.034]、AFP≥200μg/L[1.66(1.19-2.32);P=0.003]及TNM分期为ⅢⅣ28(1.62-3.21);P<0.001]与预后相关(表1-2)。多因素COX回归分析结果进一步显示：肿瘤直径>5cm[2.19(1.47-3.29);P<0.001]、门静脉癌栓[1.92(1.35-2.72);P<0.001]、Child-Pugh分级为B[1.81(1.24-3.09);P=0.037]、AFP≥200μg/L[1.47(1.05-2.07);P=0.026]是影响肝癌患者预后的独立因素。 第二部分：染色体端粒长度与肝癌预后关系的研究 本实验利用实时定量PCR的方法检测250例单纯TACE治疗的肝癌患者的平均端粒长度。多变量COX回归分析表明：外周血的平均端粒长度越长的患者其预后越差，是影响肝癌总体生存率的独立危险因子。分层分析发现：外周血的平均端粒长度越长的肝癌患者其预后越差，尤其在严重的肝癌患者中(伴有肝硬化、肿瘤大、肿瘤数目多、AFP水平高、TNM分期Ⅲ和Ⅳ的患者)；Kaplan-Meier分析亦表明端粒长度较长的人群生存时间显著短于端粒长度较短的人群，尤其在严重的肝癌患者中。总之，本实验首次表明外周血的平均端粒长度越长的肝癌患者预后越差，可作为肝癌患者预后的潜在生物标志物。 第三部分：mtDNA含量与肝癌预后关系的研究 本实验利用实时定量PCR的方法检测250例单纯TACE治疗的肝癌患者的mtDNA含量。多变量COX回归分析表明：外周血的mtDNA含量越低的患者其预后越差。分层分析发现：外周血的mtDNA含量越低的肝癌患者其预后越差；Kaplan-Meier分析亦表明mtDNA含量较低的人群生存时间显著短于mtDNA含量较高的人群。总之，本实验首次表明外周血的mtDNA含量越低的肝癌患者预后越差，可作为肝癌患者预后的潜在生物标志物。 第四部分：联合评价外周血RTL及mtDNA含量在肝癌患者预后中的价值 基于以上三部分的结果，进一步联合评价外周血RTL及mtDNA含量在肝癌患者预后中的价值。单变量及多变量COX回归分析表明：外周血平均端粒长度为第一百分位数及mtDNA含量为第四百分位数的肝癌患者与其平均端粒长度为第四百分位数及mtDNA含量为第一百分位数的肝癌患者相比，其预后较差，相对危险度分别为7.76（95％CI:2.91-20.72;P<0.001）及6.31（95％CI:2.64-15.08;P<0.001）。总之，本实验表明：外周血的平均端粒长度及mtDNA含量联合预测肝癌患者预后的效能更高，明显高于平均端粒长度或mtDNA含量的单一预测效能。