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威灵仙为毛茛科铁线莲属植物威灵仙(ClematischinensisOsbeck)、棉团铁线莲(C.hexapetala)、东北铁线莲(C.manshurica)的干燥根及根茎,属多年生草本植物,为常用中药。威灵仙具有抗炎镇痛、利胆抑菌等功效,并经常用于治疗风湿痛、摔伤和胆囊炎等多种疾病。
本文旨对威灵仙挥发性成分及其制剂进行初步研究,从而为威灵仙挥发油的进一步研究及临床研究提供充分的实验依据。具体研究如下:对威灵仙挥发油超临界二氧化碳提取工艺进行优化;对威灵仙挥发油进行GC-MS分析,并对其物理性质进行初步研究;将威灵仙挥发油制成软膏,通过采用醋酸致小鼠扭体的疼痛模型,对威灵仙挥发油软膏的镇痛作用进行研究;通过对微乳空白处方的筛选,将威灵仙挥发油制成O/W型微乳。
一、威灵仙挥发油的超临界二氧化碳提取工艺优化
目的:研究超临界二氧化碳提取威灵仙挥发油的工艺。方法:采用正交实验法优化威灵仙挥发油的超临界二氧化碳萃取工艺条件。结果:萃取条件对挥发油得率的影响大小依次排列为萃取压力、萃取时间、萃取温度;最优工艺条件为萃取压力为20MPa,萃取时间为1.5h,萃取温度为45℃;最优条件下的得油率为0.44%。结论:超临界二氧化碳萃取法用于提取威灵仙挥发油具有时间短、收率高等优点,比传统的水蒸气蒸馏法提取效率高;本实验优化的超临界二氧化碳萃取威灵仙挥发油工艺稳定可靠。
二、威灵仙挥发油化学成分分析
目的:对威灵仙挥发油的成分进行初步分析并对其性质进行初步的研究。方法:运用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对挥发油的化学成分进行分析,并对挥发油的相对密度、酸值和pH值进行测定。结果:通过GC-MS从中确认出156种化学成分,占挥发油总含量的85.03%,相对含量大于1%的成分占挥发油总含量的51.78%。酸值范围为68.461-74.061、pH值为4.66、相对密度范围为0.8433-1.0415。结论:威灵仙挥发油中的成分复杂,数量较多,主要包括有机酸,有机酸酯,萜类,醇类,酚类等化合物,且大部分成分的含量较低。本实验首次通过GC-MS发现了文献报道的威灵仙挥发油中活性成分原白头翁素。
三、威灵仙挥发油镇痛作用初步研究
目的:以软膏作为威灵仙挥发油的载体,对威灵仙挥发油的镇痛作用进行初步研究,为威灵仙挥发油制剂的进一步研究提供实验依据。方法:制备威灵仙挥发油软膏,对威灵仙挥发油软膏的外观性状、初步稳定性等质量标准进行初步研究;并采用冰醋酸致小鼠扭体反应观察威灵仙仙挥发油软膏的镇痛作用。结果:威灵仙挥发油软膏呈微黄色、均匀、细腻,并易涂布于皮肤;威灵仙挥发油软膏高剂量组和中剂量组能明显抑制醋酸引起的小鼠扭体次数。抑制率分别为55.056%、52.846%。结论:配制好的威灵仙挥发油软膏性质稳定,其高剂量组和中剂量组均具有明显的镇痛作用,说明威灵仙挥发油具有一定的镇痛作用,这为深入研究威灵仙挥发油及其制剂提供理论基础。
四、威灵仙挥发油微乳的初步研究
目的:对威灵仙挥发油形成O/W型微乳处方进行初步研究。方法:以微乳区域面积为指标,采用伪三元相图筛选威灵仙挥发油空白微乳的处方;并以微乳区域面积为指标,在获得的空白微乳处方基础上,应用伪三元相图考察表面活性剂和助表面活性剂之比(Km值)对含有威灵仙挥发油微乳形成的影响。结果:空白微乳处方中聚氧乙烯蓖麻油与聚乙二醇-400之比为1时(Km=1∶1),形成微乳的区域面积最大;不同Km值,威灵仙挥发油形成的微乳区域面积大小顺序为:Km=1∶1>Km=2∶1>Km=1∶2;确定威灵仙挥发油微乳的处方为:威灵仙挥发油为10%,油酸乙酯为5%,聚氧乙烯蓖麻油/聚乙二醇-400为35%,蒸馏水为50%。结论:通过伪三元相图初步研究确定威灵仙挥发油形成的微乳处方,形成的威灵仙挥发油微乳含量均一,性质稳定,为威灵仙挥发油相关制剂的进一步研究奠定了基础。