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目的：观察利凡诺对来源于内胚层的肝细胞（BRL-3A）、来源于中胚层人脐静脉内皮细胞（HuVEC）和成纤维细胞（L929）的生长增殖能力的影响；对利凡诺抗血管生成的作用及机制进行初步探讨。
方法：借助倒置显微镜观察细胞在经不同药物浓度（3.13μg·ml-1，6.25μg·ml-1，12.5μgml-1）、不同作用时间处理后，细胞的形态学改变，同时在荧光显微镜下观察细胞中利凡诺的荧光强度。用噻唑蓝法（MTT）以及核仁组织区银染法（AgNOR）检测利凡诺作用后，各细胞的生存和增殖能力的改变。用鸡胚尿囊膜实验（CAM）检测利凡诺对活体组织血管生成的影响。流式细胞术检测了利凡诺作用后对HuVEC细胞凋亡及周期的影响。运用RT-PCR，免疫细胞化学及Western blotting的方法分别从mRNA水平和蛋白表达水平观察利凡诺作用后HuVEC的VEGF及VEGFR2表达影响。
结果：细胞学观察：利凡诺作用24h后，肝细胞（BRL-3A）以及成纤维细胞（L929）的形态无明显变化，人脐静脉内皮细胞（HuVEC）突起变细甚至消失，细胞生长速度变慢；伴随药物浓度的增大，单位面积细胞数逐渐减少；三种细胞内利凡诺自发荧光随着药物浓度的加大和时间延长，荧光趋强。MTT结果：显示利凡诺对三种细胞的增殖都有一定的抑制作用，其中对HuVEC细胞增殖能力的抑制强于另外两种细胞（HuVEC vsBRL-3A，P<0.001；HuVEC vs L929，P<0.001）。在不同浓度利凡诺作用下，内皮细胞核仁组织区减少幅度较另外两种细胞更加明显，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。鸡胚尿囊膜实验显示利凡诺在体内也有显著的抑制血管生成作用，6.25μg·ml-1、12.5μg·ml-1用药组与NaCl组相比有显著差异。流式细胞术：利凡诺作用后对HuVEC细胞的凋亡无显著影响（P>0.05）。RT-PCR显示随着利凡诺用药浓度的增加，HuVEC细胞VEGF及VEGFR2的mRNA表达逐渐降低。免疫细胞化学方法查见：利凡诺作用48小时后，HuVEC细胞内VEGFR2随着利凡诺用药浓度的增加而降低。Western blotting检测HuVEC细胞内VEGFR2蛋白表达的变化趋势同免疫组化一致，随用药浓度的增高，蛋白表达降低。结论：利凡诺对来源不同胚层的三种细胞的增殖能力均有抑制作用，其中对HuVEC细胞的抑制尤其显著，提示该药对内皮细胞生长增殖的抑制较为特异。利凡诺能通过降低内皮细胞的VEGF及VEGFR2的mRNA表达，抑制VEGFR2的蛋白表达，而发挥抗血管生成的作用。而利凡诺对HuVEC细胞凋亡途径可能无明显影响。