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目的：
骨髓增生异常综合征(MDS)是一种造血干细胞克隆性疾病,其形态和临床过程有显著的异质性1。为了解其复杂的发病机制,MDS的分子生物学改变是其研究的重点。近年来已发现MDS患者存在某些基因异常,如TET2,ASXL1,EZH2,IDH1,DNMT3A,TEL/ETV6,RUNX1和TP532。这些基因突变可能参与了MDS的发生,并为疾病的诊断、预后分析及靶向治疗提供依据3,4。最近有报道应用下一代测序方法(nextgenerationsequencing)鉴定出MDS患者存在剪接因子3b亚单位1(SF381)基因突变,突变率约20.3%5-7。并且该突变的发生与MDS的一个典型指征即骨髓中出现环形铁粒幼红细胞(RS)有密切相关性,即近65%的存在RS的MDS患者发生SF3B1突变5。SF381位于染色体2q33.1上,编码U2小核核糖核蛋白复合体(U2snRNP)的核心成分。U2snRNP位于剪接体的催化部位,参与mRNA前体剪接加工而形成成熟的mRNA,从而调节剪接变异的多样性8。
到目前为止,国内尚未见关于SF3B1突变研究的文献报道,本实验通过建立可行的等位基因特异性PCR(AS-PCR)检测技术,分别检测了36例MDS患者SF381基因的13-15号外显子,并对SF3B1基因突变与MDS分型、临床特点之间的相关性及预后意义进行了分析。
方法：
通过AS-PCR扩增产物后测序的方法,检测36例MDS患者SF381基因的13-15号外显子中的突变发生情况。36例初诊MDS患者骨髓标本来自2011年2月至2012年1月我院门诊及住院患者。按照2001年世界卫生组织(WHO)分型诊断标准,RA型6例,RARS型4例,RCMD型7例,RAEB-Ⅰ型8例,RAEB-Ⅱ型11例。10名正常对照为我院门诊确诊无血液病患者。
主要研究方法为:(1)采集患者及对照者骨髓2ml,红细胞裂解液分离单个核细胞,运用基因组DNA抽提试剂盒进行DNA的抽提;(2)采用等位基因特异性PCR技术(AS-PCR)扩增SF3B1基因,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,所有出现目的条带患者PCR产物进行测序,对比正常SF3B1基因从而发现突变异常。(3)通过统计学分析SF3B1突变与部分临床参数间的相关性。
结果：
1.36例MDS患者中检测到5例SF381突变,该突变在MDS患者中的发生率为13.9%。突变型MDS患者中RARS型2例(4:2),RA型0例,RAE-Ⅰ型0例,RAEB-Ⅱ型1例(11:1),RCMD型2例(7:1)。标本4、5、25、28、34号在第14号外显子出现第2098位碱基上A-G突变,为赖氨酸转变为谷氨酸(K700E)。标本35号在第15号外显子出现第2169位碱基上T-G突变,没有发生氨基酸变化,无功能蛋白的改变,归为突变阴性组。10例正常对照无一例突变阳性。
2.5例SF381基因突变型与31例野生型之间在一般临床特征上差异有统计学意义,如骨髓原始细胞计数(P=0.041)、外周血白细胞计数(P=0.006)、血小板计数(P=0.006)。MDS各亚型间SF3Bl突变差异无统计学意义(P=0.088),可能与样本量小有关。有1例发生突变的标本染色体为复杂核型,1例标本在MDS进展至M2b后未检测出SF3B1基因突变,因标本例数较少,尚不能分析此突变与MDS发生染色体变化及转白之间的关系。
结论：
1.本实验检测出在MDS患者中存在SF3B1突变,突变率低于国外相关报道。
2.SF3B1突变在骨髓原始细胞计数、外周血白细胞计数、血小板计数有相关性,在MDS分型、IPSS评分、年龄分布及性别上无统计学意义。
3.MDS患者中SF3B1突变均为单一改变,为点突变,是错义突变。