脆弱拟杆菌与枯草芽孢杆菌对仔兔肠道微生物区系及免疫的影响

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hua50776007
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家兔尤其是断奶仔兔很容易发生肠道疾病,养殖中主要通过接种特定疫苗或添加抗生素来预防和治疗。但长时间使用抗生素,会引起细菌的耐药性,给人类健康带来极大威胁。开发和应用抗生素替代品是家兔养殖健康发展的必然趋势。益生菌是应用较广泛的抗生素替代品之一,但目前还没有开发家兔的特定益生菌。本论文在分离鉴定家兔优势菌脆弱拟杆菌的基础上,研究脆弱拟杆菌与枯草芽孢杆菌对仔兔肠道发育等的影响。选择性培养基结合特异引物法分离鉴定家兔肠道脆弱拟杆菌脆弱拟杆菌为严格厌氧菌,对培养环境要求苛刻,不易分离鉴定。本试验对简易厌氧装置及脆弱拟杆菌选择性培养基进行了该改进,并利用选择性培养基结合特异引物方法分离兔源脆弱拟杆菌,然后给家兔灌服所分离的脆弱拟杆菌菌液,进行安全性检测。结果显示,改进的简易厌氧罐和厌氧管可有效地培养拟杆菌类严格厌氧菌;优化的选择培养基可以富集脆弱拟杆菌,但特异引物扩增检测表明,选择性培养基平板上长出的菌落并非全部为脆弱拟杆菌。菌落16S rDNA测序结果显示,特异引物PCR检测阳性的菌落与脆弱拟杆菌相似性大于99%,与其他已知菌种的序列相似性最高为93.43%,可以确认选择性培养基结合特异引物方法分离出的菌落为脆弱拟杆菌。且灌服所分离的脆弱拟杆菌对家兔没有致病致死等现象。对家兔进行脆弱拟杆菌的分离为后续研究其与宿主关系及开发利用奠定了基础。灌服脆弱拟杆菌与枯草芽孢杆菌对仔兔肠道微生物区系及免疫的影响本试验研究了分离到的兔源脆弱拟杆菌与枯草芽孢杆菌单独及共同灌服对仔兔ADG、胃和盲肠pH、肠道形态、肠道微生物、肠道免疫相关指标以及抗氧化指标的影响。试验选取144只初生仔兔,随机分为4个组,即对照组、脆弱拟杆菌灌服组、枯草芽孢杆菌灌服组和脆弱拟杆菌+枯草芽孢杆菌灌服组,每组6个重复,每重复6只仔兔。从14d补饲时开始灌服菌液,分别在30d,44d和58d从每重复中随机挑选1只仔兔屠宰采样。灌服脆弱拟杆菌提高了14~58d仔兔ADG(P=0.026)、44d十二指肠绒毛高度/隐窝深度(VCR)(P=0.021)、30d和44d回肠VCR(P=0.046、0.004)、58d蚓突肠壁厚度(P=0.007)和30d、44d蚓突长度(P=0.022、0.006);增加了各个采样时间十二指肠、回肠和盲肠中脆弱拟杆菌数量(P<0.05)和44d盲肠中拟杆菌数量(P=0.045);增加了30d、44d十二指肠和蚓突IL-10的表达量(P<0.05)以及30d、58d蚓突和58d回肠SIgA分泌量(P=0.004、0.006、0.039)。灌服枯草芽孢杆菌提高了仔兔30~44d和14~58dADG(P=0.016、P<0.001)、30d十二指肠VCR(P=0.050)、44d回肠VCR(P=0.034);对各个采样时间十二指肠、回肠和盲肠中脆弱拟杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌及总菌数量都均没有影响;促进了蚓突30d IL-2和44d IL-10的表达(P=0.019、0.007)、44d十二指肠IL-4的表达(P=0.006)以及各个采样时间十二指肠、回肠和蚓突SIgA分泌量(P<0.05)。与对照组相比,同时灌服脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌显著增加了各个采样时间十二指肠、回肠、盲肠中脆弱拟杆菌数量,且降低了盲肠44d和回肠58d的大肠杆菌数量(P=0.027、0.042);增加了仔兔14~30d、30~44d和14~58d ADG及各个采样时间十二指肠、回肠VCR和蚓突长度(P<0.05);显著促进了各个采样时间十二指肠、回肠和蚓突中IL-10的表达以及蚓突SIgA的分泌(P<0.05),且灌服脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌对44d蚓突IL-10的表达促进作用有互作效应(P=0.039)。同时灌服脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌组14~58d ADG、十二指肠58d IL-4表达量、蚓突58d SIgA分泌量以及十二指肠30d、58d和回肠各个采样时间绒毛高度均高于灌服脆弱拟杆菌组(P<0.05)。单独及同时灌服脆弱拟杆菌与枯草芽孢杆菌均没有影响十二指肠组织的抗氧化指标(P>0.05);共同灌服组和灌服枯草芽孢杆菌组30d时血清丙二醛(MDA)值低于对照组(P=0.039、0.032)。灌服脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌对生产性能和十二指肠、回肠、蚓突的形态发育都有一定促进作用,但脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌无互作效应。共同灌服脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌可增加十二指肠、回肠、盲肠中脆弱拟杆菌数量,对IL-2、IL-4、IL-10的表达和SIgA的分泌有促进作用,脆弱拟杆菌对促进IL-10的表达起主要作用,并且脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌有互作效应。脆弱拟杆菌和枯草芽孢杆菌对促进肠道发育有加性效应。
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