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目的:通过观察中药清肠栓(QCS)对三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠病理组织改变、外周血中性粒细胞(PMN)凋亡、PMN上天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)与细胞色素C的表达和血浆中自介素(IL)-6与肿瘤坏死因子(TNF)-α含量的影响,研究QCS治疗UC的作用机制。
方法：将144只SD大鼠分为空白对照组、模型组、QCS小剂量组、QCS中剂量组、QCS大剂量组和SASP对照组,每组再进一步分为造模后第2天处理组、造模后第4天处理组、造模后第6天处理组和造模后第8天处理组四个亚组,每个亚组6只大鼠。用TNBS/乙醇诱导大鼠UC模型。造模后1h即开始给药,给药持续到处死大鼠当天。每天记录大鼠体重变化。分别于造模后第2天、第4天、第6天和第8天处死大鼠。观察大鼠结肠病理组织学改变,并进行评分;抽取外周动脉血,分离PMN,应用流式细胞仪检测培养前和培养24h后PMN的凋亡情况;应用western-blot技术检测造模后第6天和第8天分离并经过24h培养的PMN上caspase-3、caspase-8、caspase-9和细胞色素C的表达情况;应用ELISA技术检测造模后第6天抽取的外周血中IL-6和TNF-α的含量。
结果：在造模后第2天,模型大鼠结肠黏膜即有炎症和溃疡形成,病变在造模后的8天内没有明显的程度改变;QCS对模型大鼠结肠的炎症和溃疡等病理改变有治疗作用,在给药后第6天作用最明显,且中剂量QCS作用优于小剂量QCS和大剂量QCS。与空白对照组比较,同一天从其余各组大鼠外周血中分离的PMN不经过培养时的凋亡率无显著差异(P＞0.05);在造模后第6天和第8天,从模型组大鼠外周血分离的PMN经培养24h后与同样处理的从空白对照组大鼠外周血分离的PMN比较,早期凋亡延迟明显(P＜0.001);大剂量QCS和SASP在给药后第6天,对模型大鼠外周血中PMN凋亡的延迟有明显改善作用。在造模后第6天和第8天,模型组大鼠外周血PMN上caspase-3、caspase-8、caspase-9和细胞色素C的表达明显低于空白对照组;在给药后第6天和第8天,QCS剂量依赖性的增加模型大鼠大鼠外周血PMN上caspase-3、caspase-8、caspase-9和细胞色素C的表达;在造模后第6天,模型组大鼠外周血中IL-6和TNF-α的含量明显高于空白对照组,QCS可以降低升高的IL-6和TNF-α水平,以中剂量QCS作用最为明显。
结论：QCS可能通过促进UC大鼠外周血PMN凋亡和降低血中IL-6和TNF-α含量来有效改善结肠的病理损伤;通过增加PMN上caspase-3、caspase-8、caspase-9和细胞色素C的表达,降低IL-6和TNF-α含量可能是其促进PMN凋亡的部分机制。