γ-生育三烯酚调控人胃癌细胞上皮间质转化作用研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiao12112
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目的:1.拟利用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化(EMT),建立EMT模型。  2.观察γ-生育三烯酚对SGC-7901细胞EMT后的细胞迁移和侵袭能力的调控作用。  方法:1.不同浓度TGF-β1作用SGC-7901细胞24h,观察其形态变化,并采用CCK8、迁移试验、细胞侵袭试验和蛋白印迹等技术,检测TGF-β1对SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。  2.用30μmol/L的γ-生育三烯酚作用于SGC-7901细胞EMT发生过程,观察其形态学的变化,并采用迁移实验、细胞侵袭实验和蛋白印迹等技术,检测γ-生育三烯酚对胃癌细胞EMT的迁移和侵袭能力的影响。  结果:1.经10ng/mL TGF-β1诱导24h后,多数细胞变为梭型细胞边界基本消失,细胞间间隙明显增大。采用CCK-8试验检测不同浓度(0、5、10、20ng/mL)的TGF-β1对SGC-7901细胞作用24h后OD值,结果显示各作用浓度对SGC-7901的生长抑制率未发现有增加或减少趋势。体外划痕试验检测细胞迁移能力实验中,各组间距为94.67±3.06、87.00±3.61、68.67±7.77和91.00±3.00(单位pixels),10ng/mL剂量组有大量细胞迁移至划痕区,划痕间距明显变小(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果:0、5、10、20ng/mL组,侵袭的细胞数分别为152.00±5.29、169.00±6.00、299.33±10.50和176.00±11.27,且10ng/mL剂量组细胞数明显增多(P<0.05)。蛋白免疫印迹定量分析显示:不同浓度(0、5、10、20ng/mL)的TGF-β1作用SGC-7901细胞24h, E-cadherin蛋白灰度值测量结果:0、5、10、20ng/mL组,分别为0.95±0.02、0.91±0.04、0.62±0.05和0.75±0.32,10 ng/mL剂量组灰度值明显减少(P<0.05);Vimentin蛋白灰度值测量结果:0、5、10、20ng/mL组,分别为1.18±0.03、1.33±0.02、1.57±0.05和1.19±0.07,10ng/mL剂量组灰度值明显增加(P<0.05)。  2.使用30μmol/L的γ-生育三烯酚作用于SGC-7901 EMT的细胞,可以观察到细胞的形态逐渐变为良好,细胞壁变为较明显和完整,细胞间间隙明显变小。体外划痕试验检测细胞迁移能力实验中,两组间距为163.56±16.46和246.44±2.69(单位pixels),γ-生育三烯酚作用组有细胞迁移至划痕区数量明显减少,划痕间距明显变大(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果:两组侵袭的细胞数分别为292.33±7.02和142.67±4.16,且γ-生育三烯酚作用组细胞数明显减少(P<0.05)。蛋白免疫印迹定量分析显示:30μmol/Lγ-生育三烯酚作用SGC-7901细胞EMT后, E-cadherin蛋白灰度值测量结果分别为0.43±0.02和0.81±0.03,30μmol/Lγ-生育三烯酚组灰度值明显增多(P<0.05);Vimentin蛋白灰度值测量结果分别为0.95±0.03和0.57±0.02,γ-生育三烯酚作用组灰度值明显减少(P<0.05)。  结论:  1.10ng/mL TGF-β1诱导人胃腺癌SGC-7901细胞24h后,细胞明显发生EMT过程,本研究证明在人胃腺癌SGC-7901细胞系,通过10ng/mLTGF-β1的诱导24h可以成功建立EMT模型。  2.30μmol/L的γ-生育三烯酚作用SGC-7901细胞EMT过程后,细胞的迁移和侵袭能力即远端转移能力明显减低,本研究证明γ-生育三烯酚可以抑制胃癌细胞的EMT。
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