二苯乙烯苷和三七总皂苷配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的研究

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目的:研究何首乌的有效成分二苯乙烯苷(TSG)和三七的有效成分三七总皂苷(PNS)配伍抗Aβ25-35诱导PC12细胞的损伤的有效配伍剂量,并主要从胆碱能系统和氧化应激途径初步研究其机制,为临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease AD)提供初步实验依据。方法:第一部分,采用MTT法筛选Aβ25-35最适的造模浓度。采用PC12细胞作为神经细胞,以Aβ25-35诱导PC12细胞建立AD损伤模型,以细胞存活率为指标,研究2种有效成分对PC12细胞AD损伤的有效抑制浓度。在此基础上按U5(54)均匀设计、2×2析因设计实验方案,确定2种有效成分的有效配伍剂量。第二部分,PC12细胞采用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病的损伤模型,被随机分成空白组、模型组、阳性对照药多奈哌齐组(10umol/L)、TSG(200 mmol/L)组、PNS组(50 mg/L)、TSG-PNS配伍组(TSG200 mmol/L+PNS 50 mg/L)。取细胞上清液测各组的乙酰胆碱酯酶(Ac h E)及超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及计算各组细胞分化率。结果:第一部分:与空白组比较,5个不同浓度模型组的细胞存活率均有降低(P<0.01),且随着Aβ25-35浓度越高,细胞存活率越低(P<0.01)。2种有效成分都能提高aβ25-35诱导pc12细胞的细胞存活率(p<0.05)。u5(54)均匀设计实验多元方程回归分析得:2种有效成分的5个不同浓度配伍都能aβ25-35诱导pc12细胞的细胞存活率(p<0.05)。细胞存活率和tsg、pns之间呈线性关系,tsg、pns在回归方程中是具有显著水平的自变量(p<0.05)。从方程看,tsg、pns的剂量增大,细胞存活率提高,在本实验条件下,当tsg、pns分别以200mmol/l、50mg/l合用,细胞存活率最高。析因设计实验结果示:与模型组比较,tsg组、pns组有提高细胞存活率作用趋势,但差异无统计学意义(p>0.05);tsg-pns组细胞存活率明显提高(p<0.05)。两因素析因检测结果显示,主效应tsg、pns对因变量细胞存活率的影响显著(p=0.046、p=0.044),tsg与pns交互作用对因变量细胞存活率的影响不显著(p=0.053),表明2个主效应tsg和pns之间是独立的。第二部分:1.与空白组相比,模型组的细胞存活率明显降低,有显著性差异(p<0.01);tsg组、pns组及tsg-pns组的细胞存活率均高于模型组,有显著性差异(p<0.05),且细胞存活率从高到低依次为:tsg-pns组、tsg组、多奈哌齐组、pns组(p<0.01)。与tsg-pns配伍组比较,tsg组、pns组、多奈哌齐组均低于tsg-pns配伍组(p<0.01,p<0.05)。2.与空白组比较,模型组ache活力显著升高(p<0.01);与模型组比较,ache活力在各组均显著降低(均p<0.05),且配伍组及多奈哌齐组比tsg组和pns单用组降低更明显(p<0.01,p<0.05),且ache活力从低到高依次为:tsg-pns组、多奈哌齐组、tsg组、pns组(p<0.05)。与tsg-pns配伍组比较,tsg组、pns组、多奈哌齐组均高于tsg-pns配伍组(p<0.01,p<0.05)。3.与空白组比较,模型组sod活力显著降低(p<0.01);与模型组比较,sod活力在各组显著升高(均p<0.05),配伍组及多奈哌齐组均升高明显(p<0.01,p<0.05),且配伍组比tsg组和pns单用组升高更明显(均p<0.01)。sod活力从低到高依次为:pns组、tsg组、多奈哌齐组、tsg-pns组(p<0.01)。与tsg-pns配伍组比较,tsg组、pns组、多奈哌齐组均低于tsg-pns配伍组(p<0.01)。4.与空白组比较,模型组mda含量显著升高(p<0.01);与模型组比较,mda含量在各组均显著降低(均p<0.05),且配伍组及多奈哌齐组比tsg组和pns单用组降低更明显(p<0.01,p<0.05)。mda含量从低到高依次为:tsg-pns组、tsg组、多奈哌齐组、pns组(p<0.01)。与tsg-pns配伍组比较,tsg组、pns组、多奈哌齐组均高于tsg-pns配伍组(p<0.01,p<0.05)。5.与空白组比较,模型组的细胞分化率明显降低,有显著性差异(p<0.01);与模型组比较,细胞分化率在各组显著升高(均p<0.05),配伍组及多奈哌齐组均升高明显(p<0.01,p<0.05),且配伍组比tsg组和pns单用组升高更明显(均p<0.01)。各组细胞分化率从低到高的顺序依次为:PNS组、TSG组、多奈哌齐组、TSG-PNS组(P<0.01)。与TSG-PNS配伍组比较,TSG组、PNS组、多奈哌齐组均低于T SG-PNS配伍组(P<0.01)。结论:二苯乙烯苷TSG 200 mmol/L与三七总皂苷PNS 50 mg/L配伍组方对Aβ25-35损伤PC12细胞损伤具有明显的协同作用。TSG和PNS配伍治疗AD的机制可能是通过改善胆碱能损伤、抑制氧化应激损伤和保护神经细胞突触可塑性来实现的。
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