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目的: 观察针刺治疗昼夜节律性睡眠障碍的临床疗效及针刺干预失眠大鼠睡眠-觉醒昼夜节律的生物效应，并基于褪黑素初步探讨其作用机制，为临床中昼夜节律性睡眠障碍的针刺治疗提供依据。 方法: 本课题研究分为临床研究及动物实验两个方面: (1)临床研究 72例失眠受试者随机分为治疗组（n=36例）和对照组（n=36例）。治疗组针刺治疗，对照组采用假针刺法，每位受试者治疗时间为20min，每周3次，共治疗10次。治疗前后，采用匹兹堡睡眠质量指数量表(Pittsburgh Sleep Quality Index，PSQI)、失眠严重程度量表（Insomnia Severity Index，ISI）评价受试者睡眠主观改善情况;采用腕动仪(Actigraphy)进行连续7天的睡眠监测，以评价受试者睡眠客观改善情况及静息-活动节律、睡眠-觉醒节律;采用焦虑自评量表(Self-ratingAnxiety Scale，SAS)评价受试者的焦虑情绪;采用中医证候量表评价受试者中医证候变化。同时，检测受试者血清褪黑素(Melatonin，MT)、皮质醇(Cortisol，CORT)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平。 (2)动物实验 294只成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠，随机分为对照组(n=42)、模型组(n=42)、针刺非经穴组(n=42)、针刺经穴组(n=42)、MT组(n=42)、MT拮抗剂组(n=42)、针刺+MT拮抗剂组(n=42)。对照组常规饲养，不进行造模和针刺干预;其余6组均腹腔注射对氯苯丙氨酸(Para-chlorophenylalanine，PCPA)建立PCPA大鼠失眠模型，其中，针刺经穴组与针刺非经穴组于造模后第2天开始针刺干预，连续7天，穴位选取心俞(BL15)、肾俞(BL23)及其对应非经穴;MT组于造模后连续7天腹腔注射MT（30mg/kg）;MT拮抗剂组于造模后腹腔注射Luzindole（10mg/kg）;针刺+MT拮抗剂组于造模后进行针刺干预并腹腔注射Luzindole（10mg/kg）。干预完成后进行各项指标检测及分析:1、通过大鼠脑电监测观察针刺调节失眠大鼠睡眠-觉醒昼夜节律及睡眠量的生物效应;2、通过ELISA检测血清MT水平及节律、CORT激素水平及节律、5-HT水平及节律，观察针刺对MT、CORT、5-HT水平及节律的调节效应;3、通过免疫组化(Immuno-histochemistry，IHC)法，观察并计数MT1、MT2在下丘脑的表达;4、通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)检测视交叉上核(Suprachiasmatic Nucleus，SCN)中MT1 mRNA、MT2 mRNA、Cry1 mRNA、Per1 mRNA、Bmal1 mRNA、Clock mRNA的表达，观察针刺对SCN中MT受体及钟基因mRNA的调节效应。 结果: (1)临床研究 本次试验共收集病例76例，脱落4例，最终收集有效病例72例，两组受试者的性别比、年龄和体重指数(Body Mass Index，BMI)比较，差异均无统计学意义，治疗前，两组受试者的PSQI、ISI、SAS、中医证候量表评分及睡眠-觉醒昼夜节律各参数、静息-活动节律各参数、实验室指标，组间差异均无统计学意义。治疗后，治疗组有效率达91.70％，对照组有效率为13.9％，两组相比，差异具有统计学意义(P＜0.01)。与T0（治疗前）相比，治疗组T1（治疗后）、T2（随访）PSQI、ISI、SAS总分均下降，差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.01）。 Actigraphy监测结果显示，与T0（治疗前）相比，治疗组T1（治疗后）、T2(随访)破碎指数(Fragmentation index，FI)、夜间变异指数(Intradailyvaraibility，Ⅳ)、睡眠潜伏期（Sleep latency，SOL）显著下降(P＜0.01)，实际睡眠时间(Actual sleep time，AST)增加（P＜0.05），日间稳定指数(Innerdaily stability，IS)显著升高(P＜0.01)，睡眠效率（Sleep efficacy，SE）增加(P＜0.01)、余弦峰相位(Cosinior Peak time，CPT)前移（P＜0.01）;与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)。实验室检查结果显示，与T0（治疗前）相比，治疗组T1（治疗后）血清MT、5-HT水平均显著增加(P＜0.01)，CORT水平显著降低(P＜0.01)。 (2)实验研究 模型鉴定:造模后，脑电图显示模型组大鼠Wake显著增高(P＜0.05)，REM、NREM显著降低(P＜0.01)，睡眠-觉醒昼夜节律消失（余弦法，P＞0.05）;血清MT水平、5-HT水平显著下降(P＜0.01)，CORT水平显著增高(P＜0.01)，血清MT、5-HT、CORT水平昼夜节律消失（余弦法，P＞0.05），模型制作成功。 效应观察:①干预后，模型组及针刺非经穴组Wake、REM、NREM昼夜节律消失（余弦法P＞0.05）;针刺经穴组Wake昼夜节律消失（余弦法P＞0.05）;褪黑素组Wake、REM、NREM昼夜节律存在（余弦法P＜0.05）;针刺经穴组REM、NREM昼夜节律存在（余弦法P＜0.05）;针刺经穴组、褪黑素组Wake、REM、NREM振幅较模型组有增大趋势;针刺经穴组、褪黑素组Wake、REM、NREM相位较模型组有前移趋势。②干预后，与模型组相比，褪黑素组24H、12L Wake累积量显著减少(P＜0.05)，24H、12D阶段REM累积量显著增加(P＜0.05)，24H、12D、12L阶段NREM睡眠累积量显著增加(P＜0.01);针刺经穴12L阶段Wake累积量显著减少(P＜0.05），12D阶段REM显著增加(P＜0.05)，24H、12D、12L阶段NREM累积量显著增加(P＜0.05);针刺非经穴组12D阶段REM睡眠累积量显著增加(P＜0.05)。③干预后，4组血清MT、CORT、5-HT水平相比，组间差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比，针刺经穴组、褪黑素组血清MT水平显著升高，差异有统计学意义(P＜0.01);针刺经穴组、褪黑素组血清CORT水平显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05);针刺经穴组、褪黑素组血清5-HT水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）;与针刺非经穴组相比，褪黑素组血清褪黑素、5-HT水平显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 机制探讨:针刺干预可显著增加失眠大鼠12L NREM累积量（P＜0.01），显著降低下丘脑水平MT2的表达（P＜0.01）及SCN水平Per1 mRNA的表达(P＜0.01);而褪黑素拮抗剂干预的两个水平12L NREM累积量、下丘脑水平MT2的表达、SCN水平Per1 mRNA的表达相比，差异无统计学意义(P＞0.05);且针刺与褪黑素拮抗剂两因素对于12L NREM累积量、下丘脑水平MT2的表达、SCN水平Per1 mRNA的表达有交互作用，作用表现为拮抗作用(P＜0.01)。 结论: (1)临床研究 ①针刺能显著改善昼夜节律性睡眠障碍受试者的睡眠状态，显著提高其睡眠时间，改善睡眠节律，恢复睡眠结构; ②针刺能显著缓解昼夜节律性睡眠障碍受试者的焦虑情绪; (2)实验研究 ①针刺具有改善大鼠脑电睡眠-觉醒昼夜节律紊乱的作用;且对MT、5-HT、CORT分泌及下丘脑水平上MT2受体表达的昼夜节律紊乱具有调节作用; ②针刺对睡眠-觉醒昼夜节律紊乱的调节可能为通过上调血清褪黑素水平，下调MT2在下丘脑上的表达及下调SCN水平Per1 mRNA的表达进行介导。