论文部分内容阅读
目的:建立肺纤维化大鼠模型,并给予醋酸泼尼松、不同剂量的麦门冬汤进行对照观察,研究麦门冬汤这一经典方剂对肺纤维化大鼠的作用机理及其量效关系。方法:(1)分组:通过查找随机数字表法,把120只健康SD雄性大鼠随机分为正常对照组(ZCDZ组)、模型对照组(MXDZ组)、醋酸泼尼松组(CSPNS组)、麦门冬汤低剂量组(ODLD组)、麦门冬汤中剂量组(ODMD组)、麦门冬汤高剂量组(ODHD组),每组20只。(2)造模:各组动物适应性饲养1周后,模型组与各用药组通过气管内灌注博来霉素0.1ml/100g(5mg/kg)的方法复制PF大鼠模型,正常组经气管灌注生理盐水0.1ml/100g。(3)用药:在造模结束后第2天开始用药。ZCDZ组、MXDZ组用去离子水灌胃;CSPNS组用醋酸泼尼松生理盐水溶液灌胃,给药量为3.15mg/kg;麦门冬汤各剂量组用麦门冬汤药液灌胃,其中,ODLD组给药量为7.29g生药/kg,ODMD组给药量为21.87g生药/kg,ODHD组给药量为36.45g生药/kg。各组大鼠每次灌胃量均为2mL/100g,每天一次。连续灌胃14天后,各组分别随机处死10只动物,余下动物继续照前法灌胃至第28天。(4)取材:末次给药后禁食不禁水24小时,用4%水合氯醛溶液(3m L/kg)经腹腔注射麻醉,通过穿刺腹主动脉取血,摘取完整肺组织,左肺用4%多聚甲醛溶液固定,右肺用液氮冻存。(5)指标观察与检测:HE染色观察肺组织的形态学表现;酶联免疫吸附(ELISA)法测定实验动物肺组织中IFN-γ和IL-4的含量;免疫组化法观察肺组织中TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达;RT-PCR法检测TGF-β1 m RNA的表达。(6)统计:用SPSS19.0统计分析软件进行数据处理。结果:(1)HE染色:正常组大鼠在第14天、28天时肺组织结构清晰,肺泡间隔未出现炎症或纤维化表现,肺泡腔无明显渗出。模型组大鼠第14天时,肺泡间隔加宽,有淋巴细胞和巨噬细胞等炎症细胞浸润表现,可见到成纤维细胞增殖;第28天时,肺泡炎症基本消失,肺泡壁明显增厚,肺泡结构被破坏,部分肺泡塌陷或融合,肺间质有大量胶原纤维沉积,肺纤维化模型复制成功。(2)IFN-γ检测结果:与正常对照组(ZCDZ组)比较,在第14天,模型对照组(MXDZ组)、醋酸泼尼松组(CSPNS组)、麦门冬汤低剂量组(ODLD组)、麦门冬汤中剂量组(ODMD组)和麦门冬汤高剂量组(ODHD组)均低于ZCDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01),在第28天,MXDZ组、ODLD组和ODMD组低于ZCDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01),PA和ODHD组低于ZCDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与MXDZ组相比较,在第14天、28天,CSPNS组、ODLD组、ODM 组、O D H D组高于M X D Z组,其差异具有统计学意义(P<0.0 1);与C S P N S组比较,在第14天、28天,ODLD组和ODMD组低于CSPNS组,其差异具有统计学意义(P<0.01),ODHD组低于CSPNS组相比,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与ODLD组比较,在第14天、28天,ODHD组高于ODLD组,其差异具有统计学意义(P<0.01),ODMD组高于ODLD组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与ODMD组相比,在第14天、28天,ODHD组高于ODMD组,其差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)IL-4检测结果:与正常对照组(ZCDZ组)比较,在第14天,模型对照组(MXDZ组)、醋酸泼尼松组(CSPNS组)、麦门冬汤低剂量组(ODLD组)、麦门冬汤中剂量组(ODMD组)、麦门冬汤高剂量组(ODHD组)高于正常对照组(ZCDZ组),其差异具有统计学意义(P<0.01),在第28天,MXDZ组、ODLD组和ODMD组高于ZCDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01),CSPNS组和ODHD组高于ZCDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与MXDZ组比较,在第14天、28天,CSPNS组、ODLD组、ODMD组、ODHD组低于MXDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01);与CSPNS组比较,在第14天、28天,ODLD组、ODMD组高于CSPNS组,其差异具有统计学意义(P<0.01),ODHD组低于CSPNS组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与ODLD组比较,在第14天、28天,ODMD组、ODHD组低于ODLD组,其差异具有统计学意义(P<0.01);与O D M D组比较,O D H D组低于O D M D组,其差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)TGF-β1检测结果:与正常对照组(ZCDZ组)相比,在第14天,模型对照组(MXDZ组)、醋酸泼尼松组(CSPNS组)、麦门冬汤低剂量组(ODLD组)、麦门冬汤中剂量组(ODMD组)、麦门冬汤高剂量组(ODHD)组高于正常对照组(ZCDZ组),其差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),在第28天,MXDZ组、ODLD组、O D M D组、O D H D组高于Z C D Z组,其差异不具有统计学意义(P>0.0 5),C S P N S组低于Z C D Z组,其差异不具有统计学意义(P>0.0 5);与M X D Z组比较,在第1 4天,C S P N S组、O D H D组低于M X D Z组,其差异不具有统计学意义(P>0.05),ODMD组、ODHD组高于MXDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05),在第28天,CSPNS组低于MXDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.05),ODLD组、ODMD组、ODHD组低于MXDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。(5)Ⅰ型胶原检测结果:与正常对照组(ZCDZ组)比较,在第14天,模型对照组(MXDZ组)、麦门冬汤低剂量组(ODLD组)、麦门冬汤高剂量组(ODHD组)高于正常对照组(ZCDZ组),其差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),醋酸泼尼松组(CSPNS组)、麦门冬汤中剂量组(ODMD组)高于ZCDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05),在第28天,M X D Z组、O D L D组、O D M D组高于Z C D Z组,其差异具有统计学意义(P<0.01),CSPNS组、ODHD组高于ZCDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与MXDZ组比较,在第14天,CSPNS组低于MXDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.05),ODLD组、ODMD组、ODHD组与MXDZ组相比,其差异不具有统计学意义(P>0.05),在第28天,CSPNS组、ODHD组低于MXDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01),ODLD组、ODMD组低于MXDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与CSPNS组比较,在第28天,ODHD组低于CSPNS组,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。(6)在TGF-β1 m RNA表达方面:与正常对照组(ZCDZ组)比较,在第14天,模型对照组(MXDZ组)、麦门冬汤中剂量组(ODMD组)、麦门冬汤高剂量组(ODHD组)高于正常对照组(ZCDZ组),其差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),醋酸泼尼松组(CSPNS组)、麦门冬汤低剂量组(ODLD组)高于ZCDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05),在第28天,M X D Z组、C S P N S组、O D M D组高于Z C D Z组,其差异具有统计学意义(P<0.01),ODLD组、ODHD组高于ZCDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与MXDZ组比较,在第14天,CSPNS组、ODHD组低于MXDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),ODLD组、ODMD组低于MXDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);在第28天,CSPNS组、ODMD组、ODHD组低于MXDZ组,其差异具有统计学意义(P<0.01),ODLD组低于MXDZ组,其差异不具有统计学意义(P>0.05);与CSPNS组比较,在第14天,ODHD组低于CSPNS组,其差异不具有统计学意义(P>0.05),在第28天,ODMD组、ODHD组低于CSPNS组,其差异具有统计学意义(P<0.05);与O D M D组比较,在第2 8天,O D H D组低于O D M D组,其差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1麦门冬汤对博来霉素所致PF大鼠模型治疗有效。2麦门冬汤可增强IFN-γ的表达,降低IL-4的表达,提示麦门冬汤可能通过纠正Th1/Th2型细胞因子失衡来减慢肺泡炎症与肺纤维化发展进程。3麦门冬汤能降低TGF-β1与Ⅰ型胶原的表达水平,提示麦门冬汤可能通过下调TGF-β1和Ⅰ型胶原的表达来减弱博来霉素对大鼠肺组织的损伤、改善肺泡炎症、减少胶原纤维的形成来降低肺纤维化的程度。4麦门冬汤在高剂量时的治疗作用最佳。