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本文运用细胞培养、流式细胞分析、放射性免疫分析、酶联免疫吸附实验等免疫学和细胞学技术,综合研究和观察了hsBAFF对小鼠T淋巴细胞的免疫功能活性及其分泌细胞因子的变化,T淋巴细胞亚群分布和hsBAFF作用于NK细胞活性影响,探讨了hsBAFF刺激T淋巴细胞在增强NK细胞活性中的作用及其机理。结果如下:
1、hsBAFF对小鼠脾细胞中NK细胞活性影响及其与IL-2和IFN-γ关系研究
研究hsBAFF对小鼠脾细胞中NK细胞活性影响及其与IL-2和IFN-7关系。分离的脾细胞中NK细胞活性在hsBAFF(0.5,2 and 5 μg/ml)和/或IL-2(5 and 50U/ml)、IFN-γ(20 and 50 ng/ml)处理12和/或24 h后分析。采用Pemoll(R)密度梯度法获得纯的NK细胞。然后加入hsBAFF和/或IL-2、IFN-γ作用12 h后,检测NK细胞活性。结果显示,hsBAFF增强脾细胞中NK细胞活性;IL-2和IFN-γ在hsBAFF增强脾细胞NK细胞活性中的作用。我们发现单一hsBAFF没有引起NK细胞活性升高,但有或没有hsBAFF伴随IL-2或玳F-γ存在情况下NK细胞活性以剂量依赖方式增强。提示:hsBAFF通过IL-2和/或INF-γ介导NK细胞活性升高,hsBAFF提高脾细胞中NK细胞活性可能与其中含有的T淋巴细胞反应有密切的关系。
2、hsBAFF通过刺激T淋巴细胞功能增强NK细胞活性
分别采用免疫磁珠法和Percoll(R)密度梯度法获得纯的T和B淋巴细胞及NK细胞。将NK细胞分别与混合的T、B细胞,T细胞或B细胞(加2.5μg/ml anti-IgM和B细胞共刺激)共培养,并加入hsBAFF(0.5、2μg/ml)为12和24 h后,检测NK细胞活性。L另将NK细胞分别与来源于hsBAFF处理12 h的混合T、B细胞,T细胞或B细胞上清液共培养12和24 h后,检测NK细胞活性。采用放射免疫分析和ELISA检测培养上清液中IL-2和INF-γ水平。探讨hsBAFF通过T、B细胞对NK细胞活性调节作用。结果表明:hsBAFF有效地提高和混合的T、B细胞或T细胞共培养的NK细胞活性,但与B细胞共培养无作用;hsBAFF处理的混合T、B细胞或T细胞培养上清液增强NK细胞活性,但B细胞培养上清液无作用;hsBAFF刺激T细胞产生高水平的IL-2和IFN-γ。提示:hsBAFF增强NK细胞活性关联着T细胞对hsBAFF免疫反应,包括它的分泌产物。
3、hsBAFF刺激CD4+细胞功能增强NK细胞活性机理研究
hsBAFF对脾脏T淋巴细胞亚群的影响,探讨hsBAFF上调NK细胞活性的机理。选用区分CD4+和CD8+T淋巴细胞的双色抗体,采用流式细胞仪分析检测脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群分布。结果显示:在用hsBAFF(0.5和2 μg/ml)处理12和24h后,CD4+T淋巴细胞比例随hsBAFF剂量的升高而增高,其中2μg/ml hsBAFF处理组比对照组显著增高,但各组的CD8+T细胞百分比相近。CD4+/CD8+T细胞比值也随hsBAFF剂量而升高,并在实验后12h 2μg/ml hsBAFF处理组比对照组显著增高。提示:hsBAFF刺激CD4+T淋巴细胞功能可能在上调NK细胞的活性中其重要作用。